急性髓细胞白血病患者NPM1及FLT3-ITD基因突变的检测及临床意义

论文摘要

目的:建立高分辨熔解曲线（HRM）定性检测初诊急性髓细胞白血病（AML）患者NPM1基因突变和建立变性高效液相色谱（DHPLC）技术相对定量检测初诊AML患者FLT3-ITD基因突变的方法及分析突变患者的临床信息,初步探讨NPM1及FLT3-ITD基因突变与AML临床特征的关系,为AML的临床分层治疗、分子靶向治疗及预后判断提供参考指标。方法:1.采用聚合酶链反应（PCR）结合HRM、PCR结合毛细管电泳（CE）技术、测序方法对103例AML患者进行NPM1基因突变检测,对比验证PCR结合HRM技术检测NPM1基因突变的特异性和灵敏度。2.用PCR结合DHPLC技术相对定量检测103例AML患者FLT3-ITD等位基因突变的情况,并与CE检测突变的结果比对,进行该方法的有效性检验,最后测序验证突变存在情况。3.对103例初诊AML中可获得资料的86例患者NPM1、FLT3-ITD基因突变检测结果和临床资料进行分析,讨论NPM1、FLT3-ITD基因突变患者的一般临床特征、白血病免疫分型、核型分析、临床疗效和预后特点。结果:1.成功建立PCR结合HRM技术检测AML患者NPM1基因突变,特异性和灵敏度均达100%。阳性发现与测序结果吻合。2.成功建立PCR结合DHPLC技术相对定量检测AML患者FLT3-ITD基因突变,定量结果与CE技术定量结果相比无统计学差异。阳性率与测序验证吻合。3.103例AML患者中,31例（30.1%）患者检出NPM1基因突变。获得临床资料的86例患者,发现正常核型AML患者,NPM1基因突变的检出率为47.6%。共发现A、B、D三种NPM1基因突变类型。4.103例AML患者中,20例（19.4%）患者检出FLT3-ITD基因突变。20例突变患者中低比例突变6例,中等比例突变8例,高比例突变6例。测序验证并发现FLT3-ITD突变基因插入片断大小为12bp-107bp不等,均为单个插入片断。获得临床资料的86例患者,正常核型AML患者FLT3-ITD突变的检出率为26.2%。5.NPM1突变患者外周血高白细胞显著高于野生型患者（中位数21.4×109/L vs 8.4×109/L,P=0.034）,在免疫分型上与CD34低表达相关（P=0.022）。FLT3-ITD突变组患者外周血白细胞高于野生型患者（中位数23.1×109/L vs 9.5×109/L,P=0.037）,突变型骨髓原始细胞比例高于野生型（中位数0.76 vs 0.4,P=0.023）,在免疫分型上也与CD7高表达相关（P=0.024）。6.NPM1突变组与野生组的完全缓解率（CR）相比无统计学差异（P=0.883）,第一疗程化疗完全缓解率（CR1）之间相比有统计学差异性（P=0.042）。FLT3-ITD突变组与野生组的CR、CR1分别相比无统计学差异性（P=0.43,P=0.072）。7.NPM1-/FLT3-ITD-、NPM1+/FLT3-ITD-、NPM1-/FLT3-ITD+、NPM1+/FLT3-ITD+四组所占比例为57.0%、23.3%、12.8%和6.9%,CR率分别为81.6%、85%、54.5%及66.6%,一年内RR为42.5%、17.6%、50%、25%,NPM1+/FLT3-ITD-组CR率最高,一年内RR最低。NPM1-/FLT3-ITD+组CR率最低,一年内RR最高。结论:PCR结合HRM可快速准确检测AML患者NPM1基因突变,PCR结合DHPLC可准确定量检测AML患者FLT3-ITD基因突变情况。NPM1和FLT3-ITD基因突变患者有着特殊的临床特征。NPM1+/FLT3-ITD-预后最好,NPM1-/FLT3-ITD+预后最差。NPM1突变和FLT3-ITD突变可作为AML的分层治疗中可作为判断预后的独立指标之一。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表（Abbreviation）
• 前言
• 第一部分 应用高分辨熔解曲线技术检测 AML 患者 NPM1 基因突变
• 研究对象及材料
• 实验方法及步骤
• 结果
• 讨论
• 第二部分 应用变性高效液相色谱技术定量检测 AML 患者 FLT3-ITD 基因突变
• 研究对象及材料
• 研究方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分 AML 患者 NPM1 与 FLT3-ITD 基因突变 检测的临床意义
• 前言
• 研究对象材料、方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 展望
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢