穴位敷贴治疗被动吸烟大鼠气道炎症机制的研究

论文摘要

气道炎症性疾病目前并无一个公认的标准,在文献中似乎更多地涉及支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病（COPD）和囊性纤维化,或许还包括弥漫性泛细支气管炎和上气道疾病（慢性鼻炎、鼻窦炎）等等。迄今为止,学者对气道炎症的起因、调控及后果等都认为相当复杂,其发病机理涉及多种细胞、因子、介质、相互串联、相互作用的连锁反应,致使炎症持续及组织结构重建。慢性气道炎症性疾病是临床上常见病和多发病,特别是COPD已经成为全球范围内主要的慢性疾病和死亡原因之一,目前已占全球致死原因的第4位。世界银行/世界卫生组织预计到2020年,COPD将成为世界范围内第五大负担的疾病。吸烟是慢性支气管炎、肺气肿、慢性阻塞性肺病等气道炎症性疾病的主要诱因之一。虽然烟草烟雾对肺部组织器官的损害机制尚未完全明确,但其机制的复杂性是肯定的,包括香烟烟雾的多种成分直接或间接的肺组织破坏,免疫功能抑制和对病原微生物易感性增高及气流阻塞等。近年来大量的临床和实验研究表明,中药穴位敷贴对慢性气道炎症如慢性支气管炎、肺气肿和COPD等疗效独特,特别是在减少副作用、预防复发方面较西药有明显优势。本文概述了环境香烟烟雾对人体的危害,阐述了现代医学对香烟烟雾引起气道炎症的作用机制的认识,并对穴位敷贴疗法机理及其治疗气道炎症性疾病的临床研究和机理研究作了全面地总结。研究目的本课题采用国际公认的被动吸烟建立大鼠慢性气道炎症模型,选择与香烟烟雾造成慢性气道炎症关系密切的支气管病理（炎性细胞浸润）、抗蛋白水解酶含量、炎症细胞因子含量、过氧化产物含量及抗氧化物酶活性等为切入点,运用病理学、酶联免疫吸附、黄嘌呤氧化酶法和TBA法等检测技术,深入研究穴位敷贴治疗后上述指标的变化,以探讨穴位敷贴治疗慢性气道炎症的作用及其机理,为穴位敷贴治疗慢性气道炎症性疾病奠定一定的理论基础。研究方法将雄性SD大鼠32只随机分为空白组、模型组、敷贴Ⅰ组、敷贴Ⅱ组等四组,每组8只:将模型组、敷贴Ⅰ组、敷贴Ⅱ组置于自制的有机玻璃舱内,给予大鼠被动吸烟,每天二次,每次9支烟,分三次点完。穴位敷贴组于肺俞、脾俞穴处脱毛后,将敷贴药物固定于穴位处,每二天一次,敷贴Ⅰ组每次5小时,敷贴Ⅱ组贴药每次10小时,敷贴Ⅱ组发泡率在70-90%,持续六周。正常组大鼠不给予吸烟及贴药,置于相同条件下饲养。治疗结束后观察支气管组织病理特征及细胞浸润情况,并对其进行气道炎症病理评分;酶联免疫吸附法（ELISA）测定被动吸烟大鼠肺泡灌洗液中α1-抗胰蛋白酶、TNF-α、IL-8含量;黄嘌呤氧化酶法测定被动吸烟大鼠肺泡灌洗液SOD的活性、TBA法测定MDA的含量。所测数据均以均值加减标准差（（?）±s）表示,采用SPSS11.5统计软件分析数据,行单因素方差分析:方差齐时采用LSD法（最小显著差异法）:方差不齐时采用DunnettT3法。方差分析齐性检验水平α1=0.05,显著性检验水平α1=0.05。研究结果1、穴位敷贴对被动吸烟大鼠肺组织结构及炎症病理评分的影响结果显示,模型组气管、支气管黏膜上皮脱落,结构排列紊乱,纤毛倒伏,甚至有不同程度的脱落,气道腔内渗出物增多,周围肺泡壁毛细血管充血,支气管壁见大量巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞为主的炎性细胞侵润等现像。敷贴Ⅰ组与敷贴Ⅱ组虽也有上述症状,但较模型组有所减轻。说明穴位敷贴对吸烟引起的气道炎症具有一定的治疗作用。与空白组相比,模型组气道上皮脱落、中性粒细胞侵润、淋巴细胞侵润、单核巨噬细胞侵润、嗜酸性粒细胞侵润、气道腔内渗出及病理积分显著增高（P＜0.01）;与模型组相比,敷贴Ⅰ组与敷贴Ⅱ组巨噬细胞侵润及中性粒细胞侵润明显减轻（P＜0.01;P＜0.05）;与空白组相比,敷贴Ⅰ组和敷贴Ⅱ组淋巴细胞侵润明显增加（P＜0.01,P＜0.01）、嗜酸性粒细胞侵润明显增加（P＜0.01,P＜0.05）,但与模型组相比,敷贴Ⅰ组和敷贴Ⅱ组淋巴细胞侵润和嗜酸性粒细胞侵润不具有显著性差异（P＞0.05）;穴位敷贴Ⅰ组与敷贴Ⅱ组无论是从组织结构,还是气道炎症病理评分来看,都不具有显著性差异（P＞0.05）。2、穴位敷贴对被动吸烟大鼠肺泡灌洗液中α1-抗胰蛋白酶含量的影响结果显示,与空白组相比,模型组大鼠肺泡灌洗液α1-AT水平显著降低（P＜0.01）;与空白组相比,穴位敷贴Ⅰ组与Ⅱ组大鼠肺泡灌洗液α1-AT比较无显著性差异（P＞0.05）,与模型组相比,穴位敷贴Ⅰ组和Ⅱ组大鼠肺泡灌洗液α1-AT水平明显增高（P＜0.01）;穴位敷贴Ⅰ组与Ⅱ组大鼠肺泡灌洗液α1-AT比较无显著性差异（P＞0.05）。3、穴位敷贴对被动吸烟大鼠肺泡灌洗液中TNF-α,IL-8含量的影响结果显示,与空白组相比,模型组大鼠肺泡灌洗液TNF-α,IL-8水平显著增高（P＜0.01）;与模型组相比,穴位敷贴Ⅰ组大鼠肺泡灌洗液TNF-α,IL-8水平明显降低（P＜0.05,P＜0.05）,穴位敷贴Ⅱ组大鼠肺泡灌洗液TNF-α,IL-8水平明显降低（P＜0.05,P＜0.01）;穴位敷贴Ⅰ组与Ⅱ组大鼠肺泡灌洗液TNF-α,IL-8含量比较无显著性差异（P＞0.05）。4、穴位敷贴对被动吸烟大鼠肺泡灌洗液中SOD活性和MDA含量的影响结果显示,与空白组相比,模型组大鼠肺泡灌洗液SOD活性显著降低（P＜0.01）,MDA含量显著增加（P＜0.01）;与模型组相比,穴位敷贴Ⅰ组大鼠肺泡灌洗液SOD活性明显增高（P＜0.05）,MDA含量明显降低（P＜0.05）,穴位敷贴Ⅱ组大鼠肺泡灌洗液SOD活性明显增高（P＜0.01）,MDA含量明显降低（P＜0.05）;穴位敷贴Ⅰ组与Ⅱ组大鼠肺泡灌洗液SOD活性和MDA含量比较无显著性差异（P＞0.05）。结论（1）、穴位敷贴能有效减轻香烟烟雾对气道组织的破坏,降低巨噬细胞和中性粒细胞等炎性细胞对气道组织的侵润程度。（2）、穴位敷贴能有效增加被动吸烟大鼠肺泡灌洗液中α1-抗胰蛋白酶的含量。（3）、穴位敷贴能有效降低被动吸烟大鼠肺泡灌洗液中TNF-α,IL-8等细胞因子的含量（4）、穴位敷贴能有效增强被动吸烟大鼠肺泡灌洗液中SOD活性及降低被动吸烟大鼠肺泡灌洗液中MDA含量。（5）、发泡与否不影响被动吸烟大鼠气道组织巨噬细胞和中性粒细胞侵润,不影响被动吸烟大鼠肺泡灌洗液中α1—AT、TNF—α,IL—8、MDA含量及SOD活性。综上所述,穴位敷贴一方面通过降低巨噬细胞和中性粒细胞等炎性细胞对气道组织的侵润程度,减少TNF—α,IL—8等炎性细胞因子的生成,降低了气道组织的炎症反应,另一方面提高气道组织α1—AT含量、SOD活性及降低MDA含量,减轻气道组织蛋白及脂质成分的蛋白水解作用及过氧化水平,减轻炎症反应对气道组织的破坏,从而起到治疗气道炎症的作用。同时也从实验角度证明穴位敷贴治疗慢性气道炎症是一种多靶点、多途径的整体综合调节作用。研究结果显示发泡与否不影响穴位敷贴对气道炎症的治疗作用,但对发泡是否提高能穴位敷贴的治疗效果还不能肯定,有待今后进一步验证。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 文献研究
• 第一章 环境香烟烟雾对人体的危害
• 1 环境香烟烟雾与呼吸系统的关系
• 2 环境香烟烟雾与心血管系统的关系
• 3 环境香烟烟雾对妇女的危害
• 4 环境香烟烟雾对儿童和青少年的危害
• 第二章 香烟烟雾对气道炎症的作用机制
• 1 氧化应激与氧化/抗氧化物失衡
• 2 氧化应激和炎症细胞及其分泌的炎症介质
• 3 氧化应激与蛋白/抗蛋白酶失衡
• 4 氧化应激与炎前因子基因的表达与调控
• 第三章 穴位敷贴疗法机理及其治疗肺部炎症的概况
• 1 穴位敷贴疗法作用机理
• 2 穴位敷贴治疗肺部疾病提出及其理论依据
• 3 穴位敷贴治疗慢性气道炎症性疾病的概况
• 第二部分 实验研究
• 实验一 穴位敷贴对被动吸烟大鼠肺组织结构影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 1-抗胰蛋白酶影响'>实验二 穴位敷贴对被动吸烟大鼠肺泡灌洗液A₁-抗胰蛋白酶影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 实验三 穴位敷贴对被动吸烟大鼠肺泡灌洗液TNF-A、IL-8的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 实验四 穴位敷贴对被动吸烟大鼠血清SOD和MDA影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第三部分 结语
• 1 结论
• 2 展望
• 参考文献
• 附录
• 致谢