基于不同分子标记的黑龙江省野生黑木耳遗传多样性分析

论文摘要

黑木耳（Auriculαriααuriculα（L.） Underw）是我国主要栽培食用菌之一。近年来,由于生态环境日益恶化和自然灾害的发生,导致野生黑木耳资源逐年减少。因此,对野生黑木耳种质资源进行收集和保藏、遗传背景进行分析和研究,对保护黑木耳种质资源和开展黑木耳育种工作具有理论和现实意义。本研究以我国东北地区8个栽培菌株和33个野生菌株为研究材料,通过表型性状和DNA分子标记技术进行研究,结果如下：1、通过对41个菌株的10个表型性状进行主成分分析表明,耳片长、耳片宽、每袋湿耳重量等3个性状是影响产量的重要因素,是木耳产量育种的重要指标。2、用12对引物扩增的TRAP分子标记技术对41个菌株进行分析表明,供试41个菌株在相似系数为0.58的水平上分为4个类群,其中栽培菌株亲缘关系较近,聚集在第一类群中,35号菌株独自聚为1类,与其它菌株亲缘关系较远。用5对引物PJM1-EM4、PJM2-EM3、PJM2-EM8、YHM-EM3、YHM-EM5可以将供试菌株鉴别开。3、用ITS序列对41个菌株和1个银耳菌株进行遗传多样性分析表明,在99%的支持强度下,银耳菌株单独聚为一个类群,41个木耳菌株分为3个类群。4、用ISSR分子标记技术对41个菌株进行种质资源分析表明,在相似系数为0.64的水平上分为6个类群,其中1、2、4、5号栽培菌株亲缘关系较近,聚在第一类群中；6、7、8号栽培菌株都聚在第四类群中,三者相似系数较大,聚成一个亚群；21号菌株独自聚为1类,与其它菌株亲缘关系较远。利用软件ID Analysis 1.0对结果进行分析建立分子身份证,需要4个引物：P4、P5、P6、P7对供试41个菌株进行鉴别。5、用SRAP分子标记技术对41个菌株进行种质资源分析表明,供试41个菌株在相似系数为0.63的水平上分为5个类群,其中1、2号栽培菌株亲缘关系比较接近,聚在第一大类群中。4、5、6号栽培菌株都聚在第二类群中,三者之间亲缘关系较近。34、35号菌株各自聚为1个类群,与其它菌株亲缘关系较远。利用软件ID Analysis 1.0对结果进行分析建立分子身份证,引物对ME5+EM3和ME6+EM6可以对本试验涉及的41个菌株区分鉴别鉴别。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 引言
• 1.1.1 黑木耳的形态特征
• 1.1.2 黑木耳食药用价值
• 1.2 分子标记在食用菌中的应用
• 1.2.1 随机扩增多态性DNA
• 1.2.2 内部转录间隔区ITS序列
• 1.2.3 简单序列间重复扩增
• 1.2.4 相关序列扩增多态性
• 1.2.5 目标区域扩增多态性
• 1.3 研究目的及意义
• 1.4 技术路线
• 2 菌株表型特征分析
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 菌株来源
• 2.1.2 菌株表型特征测量
• 2.1.3 黑木耳表型特征主成分分析
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 菌株表型特征
• 2.2.2 主成分分析
• 2.2.3 41株黑木耳子实体形态
• 2.3 本章小结
• 3 黑木耳菌株TRAP分析
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 药品
• 3.1.3 实验仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 基因组DNA提取
• 3.2.2 提取DNA产物的纯化
• 3.2.3 TRAP引物设计及PCR程序
• 3.2.4 TRAP标记种质资源分析
• 3.2.5 TRAP标记分子身份证构建
• 3.3 结果和分析
• 3.3.1 黑木耳基因组DNA的提取
• 3.3.2 最优反应体系确定
• 3.3.3 TRAP标记种质资源分析
• 3.3.4 TRAP标记分子身份证构建
• 3.4 讨论
• 3.5 本章小结
• 4 黑木耳核rDNAITS序列分析
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.1.3 系统发育树的构建
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 菌株ITS-PCR扩增电泳图
• 4.2.2 菌株序列分析
• 4.2.3 ITS序列构建遗传进化树
• 4.3 讨论
• 4.4 本章小结
• 5 黑木耳菌株ISSR分析
• 5.1 材料
• 5.2 方法
• 5.2.1 ISSR引物筛选
• 5.2.2 反应体系的正交优化
• 5.2.3 退火温度的筛选
• 5.2.4 ISSR标记种质资源分析
• 5.2.5 ISSR标记分子身份证构建
• 5.3 结果与分析
• 5.3.1 ISSR引物的筛选及退火温度的确定
• 5.3.2 反应体系的正交优化
• 5.3.3 退火温度的筛选
• 5.3.4 ISSR标记种质资源分析
• 5.3.5 ISSR标记分子身份证构建
• 5.4 讨论
• 5.5 本章小结
• 6 黑木耳菌株SRAP分析
• 6.1 材料和方法
• 6.1.1 材料
• 6.1.2 方法
• 6.1.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测
• 6.2 SRAP标记种质资源分析
• 6.2.1 遗传多样性的分析
• 6.2.2 SRAP标记分子身份证构建
• 6.3 结果与分析
• 6.3.1 引物筛选及扩增情况
• 6.3.2 SRAP标记遗传相似性分析
• 6.3.3 SRAP标记分子身份证构建
• 6.4.讨论
• 6.5 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢