GHK和Eptifibatide的合成研究

论文摘要

蛋白质是生物体内最重要的物质之一,而氨基酸序列较短的多肽虽然在生物体内含量很少,却能发挥巨大生理作用。由于生物提取材料来源困难,而基因技术运用在小分子肽上表达量低等问题,使化学法合成多肽独具优势。本论文分别采用液相法和固相法合成了具有药用价值的三肽GHK及八肽Eptifibatide,研究了多肽合成过程中缩合剂及纯化等问题。GHK是存在于人类血浆中的一种三肽,研究表明它能促进纤维原细胞,巨噬细胞等多种细胞及组织的生长。采用液相合成法合成了三肽GHK,对甘氨酸的氨基、组氨酸的咪唑基、赖氨酸的侧链氨基进行保护,得到中间体Boc-Gly、His（trt）和Lys（Boc）;接肽反应以DMF为反应溶剂, N-羟基苯并三唑（HOBt） , N,N-二环己基碳二酰亚胺（DCC）为复合缩合剂,三氟乙酸（TFA）切除保护基团。各步反应经TLC跟踪和旋光分析,最终产物进行色谱分析和质谱鉴定。实验结果表明,在对温度、原料配比、反应时间的控制下,以HOBt/DCC/DIEA进行接肽反应、用三氟乙酸（TFA）脱除叔丁氧羰基（Boc）是一种可行的方法。实验中各步产率均在30%以上,ESI质谱测得的m/z与理论值相符。活性测定结果表明产物具有一定生物活性。Eptifibatide是一种血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂,临床研究结果显示其医用上的产业前景良好。采用固相合成法合成了八肽Eptifibatide,以Rink-Am-Resin树脂作为固相载体,Fmoc为保护策略;以TBTU/HOBt/DIEA作为肽键缩合试剂进行接肽反应,用TFA/EDT/TIS/H2O定量地从树脂上切除;制备型高效液相色谱分离纯化粗肽。同时对产品进行色谱分析和质谱鉴定。实验结果表明Fmoc合成策略中各步的缩合率均在95%以上,分离纯化后的产物纯度达到98.5%,MOLDI-TOF质谱测得的m/z与理论值相符。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 前言
• 1.1 多肽合成的研究意义
• 1.2 多肽合成历史
• 1.3 多肽的合成方法
• 1.3.1 多肽的液相合成
• 1.3.2 多肽的固相合成
• 1.4 GHK 及Eptifibatide 的研究现状
• 1.4.1 GHK 的研究现状
• 1.4.2 Eptifibatide 的研究现状
• 2 GHK 的液相合成
• 2.1 GHK 的合成设计
• 2.2 GHK 的合成
• 2.2.1 试剂与原料
• 2.2.2 仪器与设备
• 2.2.3 实验部分
• 2.3 结果与分析
• 3 Eptifibatide 的固相合成
• 3.1 Eptifibatide 的合成设计
• 3.2 Eptifibatide 的合成
• 3.2.1 原料和试剂
• 3.2.2 仪器和设备
• 3.2.3 实验部分
• 3.3 结果与分析
• 4 讨论
• 4.1 多肽合成路线的设计
• 4.2 GHK 合成的实验结果讨论
• 4.3 Eptifibatide 合成的实验结果讨论
• 5 小结
• 参考文献
• 致谢