股骨头坏死骨组织对犬骨髓间充质干细胞增殖分化影响的初步研究

论文摘要

目的：观察体外坏死股骨头骨组织对犬骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖分化的影响。方法：用液氮冷冻法制作犬股骨头坏死模型，采用分离液分离法结合贴壁法获取犬BMSCs，利用Transwell培养板将BMSCs与不同骨组织共培养，依据培养条件不同分3组，空白组：10%胎牛血清+DMEM培养基，对照组：10%胎牛血清+DMEM培养基+正常股骨头骨组织，实验组：10%胎牛血清+DMEM培养基+坏死股骨头骨组织。观察细胞生长状况，采用噻唑蓝（MTT）比色法测各组细胞相对数，作细胞内碱性磷酸酶染色并检测培养液上清中碱性磷酸酶浓度，茜素红染色、油红O染色分别观察钙结节、脂滴的形成。结果：对照组与实验组BMSCs增殖率高于空白组，在1d、3d、5d差异有统计学意义（P＜0.05），实验组增殖率在5d、7d时大于对照组（P＜0.05）；7d时细胞内碱性磷酸酶染色示对照组与实验组均为阳性，第7d、9d培养液上清中碱性磷酸酶浓度按以下顺序依次减小，对照组＞实验组＞空白组（P＜0.05）。21d时茜素红染色示各组均有钙结节形成，数量按以下顺序依次减小，对照组＞实验组＞空白组，21d时油红O染色示各组均未见有脂滴形成。结论：正常与坏死股骨头骨组织对BMSCs增殖均有促进作用，并且均可诱导BMSCs向成骨细胞分化而未向脂肪细胞分化，坏死股骨头骨组织对BMSCs增殖的促进作用稍强；而对BMSCs的成骨诱导能力弱于正常股骨头骨组织。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 中英文缩略词表
• 第1章 引言
• 第2章 材料
• 2.1 实验动物
• 2.2 主要试剂及耗材
• 2.3 自配试剂
• 2.4 主要仪器设备
• 第3章 方法
• 3.1 液氮冷冻法制作犬股骨头坏死模型
• 3.1.1 术前准备
• 3.1.2 手术步骤
• 3.1.3 术后处理
• 3.2 细胞培养
• 3.2.1 犬骨髓间充质干细胞分离与原代培养
• 3.2.2 细胞传代
• 3.2.3 细胞冻存
• 3.2.4 细胞复苏
• 3.3 不同股骨头碎骨块制备及组织学检测
• 3.4 体外股骨头骨组织与 BMSCs 共培养
• 3.5 BMSCs增殖的检测
• 3.6 BMSCs分化的检测
• 3.6.1 成骨分化检测
• 3.6.2 成脂分化检测
• 3.7 统计学方法
• 第4章 结果
• 4.1 坏死股骨头组织切片镜检
• 4.2 细胞分离与培养
• 4.3 细胞增殖检测结果
• 4.4 细胞培养液上清中 ALP 浓度检测结果
• 4.5 细胞 ALP 染色
• 4.6 茜素红染色
• 4.7 油红 O 染色
• 第5章 讨论
• 5.1 ON的发病机制与动物模型研究
• 5.2 Transwell共培养的应用意义
• 5.3 BMSCs的生物学特点
• 5.4 骨坏死的病理与坏死微环境下BMSCs的增殖分化能力变化
• 5.5 骨组织中的生物活性成分与应用
• 5.6 小结
• 第6章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 综述
• 参考文献