白花败酱的综合开发及提取物对毒死蜱抑制吸收的作用研究

论文摘要

农药的广泛使用使世界粮食生产获得了巨大的丰收，但随之而来的问题是食品中农药残留超标，解决食品中农药残留问题业已成为食品安全的重要课题之一。对于食品中农药残留，目前的解决方法主要有：通过加强农药使用管理，减少使用量；通过清洗、去皮等物理方法减少食物中农药残留量；通过臭氧等化学物质处理分解食品中残留农药，从而达到减少农药残留的目的。本文的主要研究目标是：研究一种能够增加小肠蠕动的功能性成分来抑制或减少食品中残留农药的吸收，从而达到减少农药残留危害的目的。主要研究内容分四个方面：①寻找增加小肠蠕动的功能组分；②对组分进行提取工艺优化；③对抑制农药（本文采用毒死蜱作为研究试材）吸收作用的研究；④原料的引种及快速繁殖研究，以确保原料来源。苦菜，学名败酱草（Herba Patriniae）属败酱科多年生草本植物，分黄花败酱（Patrinia scabiosaefolia Fisch）和白花败酱（Patrinia villosa）。白花败酱（本文试材）作为一种中草药在医学上用来治疗腹泻与痢疾，但经作者食用后发现，还有很强的抗便秘作用。本文通过小鼠小肠蠕动试验，对白花败酱的汁、茎叶、挥发性成分及汁液中多糖，单宁成分及果胶成分进行了试验。水提取物中白花败酱单宁、果胶、多糖均有显著增强小鼠小肠蠕动的功能，其中单宁作用最强，30min小肠推进百分率达到83.3％；用65μm CW-DVB顶空固相微萃取分析白花败酱挥发性成分，未发现与促进肠蠕动密切相关的化学物质。因此把单宁成分作为进一步研究的试材。利用单因素试验和L9（33）正交试验，用纯丙酮作为提取溶液，对新鲜白花败酱的提取工艺进行优化，料液比为1：60、提取温度为35℃、提取时间为4h时，提取得率最高，此时单宁的提取率为6.84％。取禁食24小时的雄性ICR大鼠48只，每组12只单养于代谢笼中，给每组大鼠以40mg/kg体重(1/4LD50)剂量的毒死蜱油溶液灌胃，再灌服20mg/Kg、50mg/kg、100mg/kg的白花败酱单宁溶液及三蒸水，采集不同时间的血样、尿样粪样，正己烷液液萃取，气相色谱测定毒死蜱浓度。结果显示：白花败酱单宁能够有效减少大鼠血、尿中毒死蜱的浓度，同时增加粪便中毒死蜱的浓度，在给药量为每千克大鼠体重100mg的白花败酱单宁溶液时，大鼠血中毒死蜱浓度（4小时）可比对照组降低98％。进一步研究了利用叶片进行白花败酱组织培养的一种方法，总结了一条白花败酱露地、保护地栽培技术，快速繁殖技术及田间管理技术。本文还对白花败酱多糖的提取工艺，多糖的分离纯化、分子量测定、降血脂作用，增强免疫功能作用、抑制肿瘤作用及降血糖作用进行了研究。

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引言

第一章白花败酱对小鼠小肠蠕动的影响

1 败酱草研究进展

1.1 化学成分研究

1.1.1 挥发油和油脂

1.1.2 香豆素

1.1.3 皂甙

1.1.4 环烯醚萜甙

1.2 功能活性

1.2.1 镇静作用

1.2.2 抑菌作用

1.2.3 保肝利胆作用

1.2.4 对血液系统作用

1.2.5 抗肿瘤作用

1.2.6 皮肤搔痒

1.3 毒副作用

2 白花败酱对小鼠小肠蠕动的影响

2.1 试验方案

2.2 白花败酱营养成分分析

2.2.1 材料与方法

2.2.2 结果与讨论

2.3 白花败酱茎叶与水提取物抗便秘作用研究

2.3.1 材料与方法

2.3.1.1 材料

2.3.1.2 实验方法

2.3.1.3 结果与讨论

2.4 白花败酱水溶性成分对小鼠小肠蠕动的影响

2.4.1 材料与方法

2.4.1.1 材料

2.4.1.2 方法

2.4.1.2.1 PV中可溶性多糖提取方法

2.4.1.2.2 PV中果胶提取方法

2.4.1.2.3 椪柑果胶提取方法

2.4.1.2.4 黑便排出时间和排便频度实验

2.4.1.2.5 小肠推进实验

2.4.2 结果与讨论

2.4.2.1 不同处理对小鼠排便时间的影响

3 PV挥发性成分的分析

3.1 固相微萃取的研究进展

3.1.1 固相微萃取技术装置

3.1.2 原理及操作方法

3.1.2.1 直接固相微萃取

3.1.2.2 顶空固相微萃取

3.1.3 影响SPME萃取效率的因素及优化措施

3.1.3.1 固相涂层的性质

3.1.3.2 萃取方式的选择

3.1.3.3 萃取温度的确定

3.1.3.4 萃取时间的确定

3.1.3.5 样品体积和基体效应的影响

3.1.3.6 其它影响因素

3.1.4 SPME技术在食品分析中的应用

3.1.4.1 食品风味鉴定方面

3.1.4.2 异味检测方面

3.1.4.3 在农药残留检测方面的应用

3.1.4.4 在激素残留检测中的应用

3.1.4.5 存在的问题及展望

3.2 PV的固相微萃取-气相色谱-质谱分析

3.2.1 材料与方法

3.2.1.1 材料

3.2.1.2 方法

3.2.2 结果与讨论

4 本章小结

第二章白花败酱功能物质的提取工艺研究

1 白花败酱可溶性多糖的提取工艺研究

1.1 材料与方法

1.1.1 材料

1.1.2 方法

1.1.2.1 PV多糖提取方法

1.1.2.2 多糖测定方法

1.1.2.3 单因素试验

1.1.2.4 正交试验

1.2 结果与讨论

1.2.1 多糖的测定

1.2.2 热浸提工艺参数对PV中可溶性多糖得率的影响

1.2.2.1 料液比因素的影响

1.2.2.2 温度因素的影响

1.2.2.3 时间因素的影响

1.2.2.4 热浸提PV中可溶性多糖得率的正交试验

1.2.2.5 正交试验的方差分析结果

1.2.2.6 正交试验各处理的多重比较结果

1.2.2.6.1 料液比各水平间差异显著性SSR检验

1.2.2.6.2 时间各水平间差异显著性SSR检验

1.2.2.6.3 温度各水平间差异显著性SSR检验

1.3 结论

2 白花败酱可溶性多糖的分离纯化及分子量测定

2.1 白花败酱水溶性多糖的分离和纯化

2.1.1 材料与方法

2.1.1.1 实验材料

2.1.1.2 实验仪器

2.1.1.3 试验方法

2.1.2 结果与讨论

2.2 白花败酱多糖的分子量测定

2.2.1 材料与方法

2.2.1.1 实验材料

2.2.1.2 实验仪器

2.2.1.3 实验方法

2.2.2 结果与讨论

3 植物单宁的生理活性及其应用研究进展

3.1 植物单宁的概述

3.1.1 水解单宁

3.1.2 缩合单宁

3.1.3 复杂多酚

3.2 单宁的生理活性研究

3.2.1 植物单宁的负面作用

3.2.1.1 植物单宁的抗营养活性

3.2.1.2 植物单宁的肝毒素活性

3.2.1.3 植物单宁的致癌作用

3.2.2 植物单宁的积极作用

3.2.2.1 植物单宁的抗癌活性

3.2.2.2 植物单宁的抗菌活性

3.2.2.3 植物单宁的抗艾滋病活性

3.2.2.4 植物单宁的免疫调节活性

3.2.2.5 预防心脑血管疾病

3.3 植物单宁在食品中的应用

3.3.1 对食品风味的影响

3.3.2 辅色作用

3.3.3 在酒类生产中的作用

3.3.3.1 在啤酒生产中的作用

3.3.3.2 在葡萄酒生产中的作用

3.3.4 作为食品添加剂

3.4 展望

4 新鲜白花败酱中单宁成分的提取

4.1 材料与方法

4.1.1 材料

4.1.2 方法

4.1.2.1 PV单宁提取方法

4.1.2.2 单宁含量的测定方法

4.1.2.3 提取剂浓度的选择

4.1.2.4 单因素实验

4.1.2.5 正交试验

4.2 结果与分析

4.2.1 单宁的测定

4.2.2 热浸提工艺参数对单宁提取率的影响

4.2.2.1 提取剂浓度的选择

4.2.2.2 温度的影响

4.2.2.3 时间的影响

4.2.2.4 料液比的影响

4.2.2.5 热浸提PV中单宁提取率的正交试验

4.2.2.6 正交试验的方差分析结果

4.2.2.7 正交试验各处理的多重比较结果

4.3 讨论

5、本章小结

第三章白花败酱单宁抑制毒死蜱吸收作用的研究

1 农药残留检测技术新进展

1.1 样品的提取和净化

1.1.1 固相萃取

1.1.2 固相微萃取

1.1.3 超临界流体萃取

1.1.4 凝胶渗透色谱法

1.2 检测方法

1.2.1 气相色谱法

1.2.2 高效液相色谱法

1.2.3 免疫分析法

1.2.4 超临界流体色谱法

1.2.5 毛细管电泳法

1.2.6 其他检测方法

1.3 发展趋势

2 白花败酱单宁抑制毒死蜱吸收作用的研究

2.1 材料与方法

2.1.1 实验材料

2.1.2 实验方法

2.1.2.1 动物实验方法

2.1.2.2 毒死蜱含量的测定

2.2 结果与讨论

2.2.1 标准曲线及线性范围

2.2.2 回收率与精密度试验

2.2.3 白花败酱单宁对毒死蜱吸收的影响

2.2.3.1 白花败酱单宁对毒死蜱吸收的影响及可行性

2.2.3.2 动物实验方法讨论

2.2.3.3 提取净化方法的优化

3 本章小结

第四章白花败酱的其他功能作用

1 白花败酱多糖降血脂作用研究

1.1 多糖功能及降血脂作用

1.2 材料与方法

1.2.1 材料

1.2.2 方法

1.2.2.1 PV多糖的急性毒性试验

1.2.2.2 PV多糖的降血脂试验

1.3 结果与讨论

1.3.1 PV多糖的急性毒理试验

1.3.2 PV多糖对大鼠体重变化的影响

1.3.3 PV多糖对大鼠血清中甘油三酯的影响

1.3.4 PV多糖对大鼠血清中总胆固醇的影响

1.3.5 PV多糖对大鼠血清中高密度脂蛋白胆固醇的影响

1.3.6 PV多糖对大鼠血清中低密度脂蛋白胆固醇的影响

1.4 小结

2 PV功能成分对癌症、免疫作用和血糖的影响

2.1 测定原理

2.2 实验材料与方法

2.2.1 主要实验材料

2.2.2 实验方法

180荷瘤小鼠免疫功能影响的试验'>2.2.2.1 PV多糖对S₁₈₀荷瘤小鼠免疫功能影响的试验

2.2.2.2 PV多糖的降血糖作用试验

2.3 实验结果

180荷瘤小鼠免疫功能影响'>2.3.1 PV多糖对S₁₈₀荷瘤小鼠免疫功能影响

180移植瘤生长的影响'>2.3.1.1 PV多糖对S₁₈₀移植瘤生长的影响

180小鼠免疫功能的影响'>2.3.1.2 PV多糖对S₁₈₀小鼠免疫功能的影响

2.3.2 PV多糖的降血糖作用

2.3.2.1 PV多糖对四氧嘧啶所致高血糖小鼠的降糖作用

2.3.2.2 PV多糖对高血糖模型小鼠耐糖量的影响

2.4 讨论

180荷瘤小鼠免疫功能影响'>2.4.1 PV多糖对S₁₈₀荷瘤小鼠免疫功能影响

180移植瘤生长的影响'>2.4.1.1 PV多糖对S₁₈₀移植瘤生长的影响

2.4.2 PV多糖对小鼠免疫功能的影响

2.4.3 PV多糖的降血糖作用

2.5 小结

3 本章小结

第五章白花败酱的引种栽培及组织培养

1 PV的保护地（大棚）栽培技术及管理

1.1 栽培技术

1.2 PV的高产、优质、高效栽培技术

1.3 PV的繁殖技术

1.4 PV生物学特性及栽培模式

1.4.1 PV的生物学特性

1.4.2 栽培技术

1.4.2.1 春露地栽培技术

1.4.2.2 越冬栽培技术

1.5 病虫害防冶

1.6 小结

2 白花败酱的组织培养技术

2.1 材料与方法

2.1.1 材料

2.1.2 方法

2.2 结果与讨论

3 本章小结

结论

参考文献

致谢

作者简历

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