论文摘要
阿魏酸是自然界广泛存在的一种酚酸，普遍存在于众多中药材中，它在治疗肾脏疾病方面拥有突出的疗效。主要表现在：拮抗内皮素、血栓素A2和氧自由基；抑制血小板聚集；抗炎等。NO是参与机体的一种重要生物调节因子，对肾脏的影响主要表现在：改善肾脏血流动力学；降低肾脏阻力；抑制钠的重吸收和促进尿钠排泄等。根据阿魏酸和NO两者在肾脏疾病治疗中的重要作用，本课题从以下几个方面进行了研究工作：1.设计合成了一系列阿魏酸NO供体的衍生物，希望能够发现二者协同作用较好的治疗肾脏疾病的药物。终产物为阿魏酸钠盐NO供体衍生物（化合物12-14），通过核磁和质谱确定了所有衍生物的化学结构。2.对化合物12-14进行了体外活性测试：（1）用Greiss法测定了阿魏酸NO供体盐类化合物12-14在体外NO释放的情况，与空白对照组和阿魏酸钠盐组相比，化合物12-14能够在不同的环境中释放NO。如在半胱氨酸环境中，12h时化合物12-14的NO释放率分别达到43.94±2.35%，27.06±1.23%和22.82±0.06%。故在同一环境中，化合物的释放能力大小为：化合物12＞13＞14。对于化合物12，在PBS、半胱氨酸、血清、肾脏、肝脏的环境中最大释放率分别为：7.27±0.17%，43.94±2.35%，8.16±0.12%，9.77±0.16%和9.06±0.07%。故对于同一种药物，在半胱氨酸环境中的释放能力最强，在血清、肾脏和肝脏匀浆液存在的情况下均有一定程度的NO释放。（2）考察化合物12-14对大鼠离体主动脉环的舒缩作用。化合物12-14对KCl预收缩的大鼠主动脉环具有不同程度的舒张作用：分别为77.15±2.53%，65.59±0.71%和56.96±1.48%。加入亚甲基蓝（MB）后分别降至72.72±1.52%，49.57±1.51%和46.02±2.07%，说明亚甲基蓝能够阻断NO对血管的舒张作用。从而判断化合物12-14的血管舒张作用之一是通过释放NO激活鸟苷酸环化酶（GC），提高环鸟核苷单磷酸水平，使血管舒张。（3）采用Bron比浊法，考察化合物12-14对ADP诱导的血小板聚集作用的影响。与空白组相比，化合物12-14对ADP诱导的血小板聚集具有一定的抑制作用，该抑制作用强于阿魏酸钠抑制血小板聚集的活性，说明阿魏酸在引入NO供体后增强了其抑制血小板聚集的活性，即化合物12-14结合了阿魏酸和NO供体抑制血小板聚集的活性，达到协同作用。（4）对化合物12-14的凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血活酶时间（APTT）进行了测定。结果显示化合物12-14的PT值和APTT并没有显著改变，推测其在内源性凝血系统和外源性凝血系统阶段没有表现出抗凝活性。而在整个凝血过程与血栓的形成过程中，化合物12-14主要通过有效抑制血小板聚集来达到抗凝作用。3.针对化合物6对糖尿病肾病小鼠的干预作用进行了初步研究。结果显示，化合物6作为阿魏酸NO供体衍生物，不但能够显著降低糖尿病肾病小鼠血清中葡萄糖、尿素氮和肌酐水平，而且显著下调肾脏中MDA和羟脯氨酸水平，升高肾脏中SOD和NO水平。糖尿病小鼠肾脏病理分析显示化合物6能够有效减少间质胶原沉积。因此，化合物6可通过干预多种糖尿病肾病发病机制实现对肾脏的保护作用，从而减轻肾小球硬化，减轻蛋白尿，改善肾功能，具有进一步研究的价值。