论文摘要
目的观察白花丹参对人脐静脉血管内皮细胞损伤是否具有保护作用;研究其发挥作用的机制与血管内皮细胞凋亡的关系;探讨白花丹参对凋亡相关蛋白Bcl-2表达的影响。为评价白花丹参的药用价值提供依据。方法应用酶消化灌注法培养人脐静脉血管内皮细胞,采用形态学观察和Ⅷ因子抗体免疫荧光检测法进行鉴定;取对数生长期的细胞按如下分组进行处理:（1）正常对照组;（2） H2O2损伤模型组:H2O2 （ H2O2的终浓度为2mmol/L）;（3）白花丹参高剂量组:白花丹参（0.10 g/ml）+ H2O2;（4）白花丹参中剂量组:白花丹参（0.03 g/ml）+ H2O2;（5）白花丹参低剂量组:白花丹参（0.01 g/ml）+ H2O2;干预4小时后,应用形态学观察法和MTT法检测各组血管内皮细胞增殖存活情况;应用流式细胞技术和AO、EB联合染色观察各组细胞凋亡的情况;应用免疫细胞荧光技术检测各组Bcl-2蛋白表达的情况。结果1.细胞培养与鉴定结果（1）形态学观察:HUVEC接种于培养瓶5-7天后细胞己基本融合,呈特征性的“铺路石”样镶嵌排列。（2）Ⅷ因子抗体免疫细胞荧光技术鉴定HUVEC:共聚焦显微镜下可见95%以上的细胞核周围呈黄绿色发亮荧光。以上结果证明培养的细胞为血管内皮细胞。2.白花丹参对血管内皮细胞增殖存活情况的影响（1）形态学观察:H2O2损伤模型组细胞损伤明显,经白花丹参高、中、低各剂量组的干预,受损情况均有显著改善,且白花丹参的剂量越高损伤程度越轻。（2） MTT法:正常对照组细胞活性最高,吸光度值为0.744±0.043,H2O2损伤模型组最低,吸光度值为0.082±0.009,二者比较有显著的统计学差异（P<0.01）。白花丹参高剂量组、白花丹参中剂量组和白花丹参低剂量组的吸光度值依次为0.621±0.065、0.529±0.065和0.305±0.023,与H2O2损伤模型组相比,白花丹参高、中、低剂量组均有显著性差异（P<0.01）。3.白花丹参对血管内皮细胞凋亡的影响（1）流式细胞技术:H2O2损伤模型组内皮细胞凋亡率（%）为40.63±3.48,明显高于正常对照组的7.93±1.45（P<0.01）;白花丹参高剂量组、白花丹参中剂量组和白花丹参低剂量组的凋亡率依次为15.47±5.20、21.34±4.90和31.08±1.93,与模型组相比均有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。（2）AO-EB染色结果与流式细胞技术检测结果基本一致。4.白花丹参对血管内皮细胞Bcl-2蛋白表达的影响正常对照组Bcl-2蛋白表达的平均荧光强度为19.33±1.17;与之相比,H2O2损伤模型组Bcl-2蛋白表达的平均荧光强度为14.61±0.53,明显减低（P<0.01）;与H2O2损伤模型组相比,白花丹参高、中剂量组使血管内皮细胞Bcl-2蛋白表达明显增加（P<0.01）,平均荧光强度分别为20.78±1.88和17.50±0.32;而白花丹参低剂量组的平均荧光强度为15.40±0.38,与H2O2损伤模型组相比没有统计学差异（P >0.05）。结论1.白花丹参提取物可以抑制由H2O2诱导的血管内皮细胞凋亡,保护血管内皮细胞的活性。2.白花丹参提取物抑制血管内皮细胞凋亡的作用与提高Bcl-2蛋白表达有关。