论文摘要
为了解中国蜂胶化学组成及抗氧化活性多样性,并探索其原因,本文对采自中国20个省份29个地区蜂胶醇提物（Ethanol extract of propolis,EEP）的化学组成及抗氧化活性进行研究,以期为中国蜂胶分类、溯源、标准化及产业化提供理论依据。实验采用分光光度法测定了EEP色度、特定吸收率(E1cm1%),及总酚、总黄酮、黄酮-黄酮醇、黄烷酮含量;并选择了23种化合物为对照品,利用高效液相色谱（High-performance liquid chromatography,HPLC）测定了EEP中的化学组成,建立了中国蜂胶指纹图谱:普鲁士兰法测定EEP总抗氧化能力,以1,1-二苯基-2-苦基肼（2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH）为清除对象,考查EEP清除自由基活性。研究结果如下。1.优化EEP提取工艺,以总黄酮为评价指标,得到最佳提取条件为:固液比1:20,60%乙醇在35℃提取4 h。再以优化的条件制备获得不同地区EEP,采用分光光度法对其理化特性进行分析。研究表明,不同地区EEP理化性质及化学组成上均存在一定差异。不同地区蜂胶,各种有效成分含量不同。在EEP得率、总酚、总黄酮含量上东北和西南蜂胶很相近,华北、华中、华东和西北蜂胶相似,而热带蜂胶组成明显不同。不同地区蜂胶只是有效成分的含量存在差异,但EEP中各组成比例基本一致。不同颜色的蜂胶化学组成差异比较明显,颜色较浅的蜂胶中各种有效成分含量比较高。其中墨绿色蜂胶中总黄酮含量最高,而黄绿色蜂胶中总酚含量最高。不同颜色蜂胶EEP得率相近,EEP的E1cm1%值、总黄酮和黄酮-黄酮醇含量之间存在明显的正相关;总酚和黄烷酮含量之间存在一定的相关性。2.选择了23种化合物为对照品,优化和建立了适用于对照品及EEP分离检测的HPLC条件,并对实验方法的可靠性进行检验。结果表明,甲醇-0.1%甲酸可有效抑制峰拖尾,使峰形对称;分组后的混合对照品在256、280 nm出峰数及峰形好:对照品在各自线性范围内,线性关系良好,且在测定时间内性质稳定。各对照品加标回收率均在92%以上,符合检测要求。对最低检测限进行分析,结果表明仪器敏灵度较高。以上各项指标表明,仪器条件和实验方法均较可靠,可作为样品分离、检测条件。3.利用优化的HPLC条件,对不同地区EEP化学组成进行分析;并建立了中国蜂胶指纹图谱,尽管特征峰较少,但由于本实验取材范围广,样品化学组成差异较大,因此,该图谱可以准确的反映中国蜂胶的基本化学组成。通过对不同地区EEP中所含对照品种类及含量进行考查,结果表明,p-香豆酸、3,4-二甲氧基肉桂酸、肉桂酸、槲皮素、生松素和白杨素是所有样品中普遍存在的,且后两种成分含量比较高。对不同颜色及不同地区EEP进行主成分分析,结果表明,除热带蜂胶外,EEP颜色与产地对其化学组成影响不大。4.利用普鲁士兰法测定不同地区EEP总抗氧化能力,以DPPH作为清除对象,考查了其清除自由基活性。结果表明,不同地区EEP在这两种活性上存在较大差异。总抗氧化能力最高为2.47（黑龙江,HLJ）,最低为0.44（云南,YN-2）。清除DPPH自由基活性指数最高为9.94（青海,QH）,最低为0.46（广东,GD-2）。5.EEP化学组成和抗氧化活性之间的数学模型Y总抗氧化=0.817+0.004XE1cm1%+0.001X总酚+0.002X总黄酮-0.005X黄酮-黄酮醇-0.008X黄烷酮;YDPPH=0.385+0.009XE1cm1%+0.005X总酚+0.006X总黄酮-0.017X黄酮-黄酮醇-0.008X黄烷酮,从理论上证实了EEP生物活性与其化学组成之间存在相关性。目前对中国蜂胶的定位比较低,使中国蜂胶的发展受到影响。本实验结果表明,与阿根廷、美国等蜂胶相比,中国蜂胶（除热带蜂胶）中总酚、总黄酮有效成分含量较高;其清除DPPH自由基活性与芦丁等相似,有些甚至可以超过BHA等化学抗氧化剂。因此,蜂胶作为保健食品、天然抗氧化剂潜力巨大。