论文摘要
目的本研究旨在观察α2肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾对小檗碱抗内毒素血症效应的影响，进一步探讨α2肾上腺素能受体在其中的作用。方法第一部分：观察育亨宾与小檗碱对内毒素血症及脓毒症小鼠死亡率的影响。第二部分：LPS腹腔注射后12h，收集血清测定小鼠肝、肾功能，并留取小鼠肺、肝、肾及小肠标本，在光学显微镜下观察育亨宾和／或小檗碱对内毒素血症小鼠器官组织结构的影响。第三部分：在腹腔注射LPS后不同时点，收集小鼠血清，用酶联免疫吸附分析方法测定小鼠血清中肿瘤坏死因子—α（TNF-α），干扰素—γ（IFN-γ），白细胞介素—10（IL-10），IL-1β，IL-6及IL-12p40的水平；硝酸还原酶法测定血清中一氧化氮（NO）的水平。第四部分：观察育亨宾与小檗碱联合应用对小鼠内毒素性肺损伤的影响：LPS腹腔注射后12h，留取右肺测定肺组织湿／干重比。另分批实验，行支气管肺泡灌洗术，分析肺泡灌洗液（BALF）中总蛋白含量以及白细胞计数（WBC），ELISA法测定肺泡灌洗液中血栓素B2（TXB2）、白三烯水平；蛋白免疫印迹方法分析肺组织中胞浆型磷脂酶A2（cPLA2）的表达及磷酸化水平。结果1．事先腹腔注射育亨宾能明显增强小檗碱抗内毒素血症的作用，二者联合应用能显著提高内毒素血症小鼠的生存率，其中以2mg／kg育亨宾与50mg／kg小檗碱联合应用效果最好，48h小鼠生存率为75％，明显高于LPS组（14％）及单独小檗碱防治组（40％），2mg／kg育亨宾单独应用并不能提高内毒素血症小鼠的生存率。2mg／kg育亨宾与50mg／kg小檗碱混合制剂灌胃也能明显降低内毒素血症小鼠的死亡率，6d小鼠死亡率（20％）明显低于LPS组（100％）。在小鼠盲肠结扎穿孔（CLP）模型中，2mg／kg育亨宾与50mg／kg小檗碱混合制剂灌胃亦能提高CLP小鼠的生存率。2．50mg／kg小檗碱防治组小鼠肝、肺及小肠损伤程度轻于LPS组；2mg／kg育亨宾与50mg／kg小檗碱混合制剂防治组小鼠肝、肺、小肠及肾脏的损伤程度也明显轻于LPS组。3．小檗碱能显著降低LPS引起的小鼠血清中TNF-α、NO及IL-1β的释放，并增加内毒素血症小鼠血清中IL-10、IFN-γ及IL-12p40的水平，对LPS诱导的IL-6释放无明显影响。内毒素血症时，α2受体拮抗剂育亨宾并不阻断小檗碱对TNF-α、NO及IFN-γ的影响，但能阻断小檗碱对IL-1β及IL-12 p40的影响，并能明显增加IL-10及IL-6的释放。4．小檗碱防治组小鼠肺损伤程度较轻，右肺湿／干重比值明显低于LPS组（P＜0.05）；BALF中蛋白含量、WBC和PMN计数及TXB2含量都明显低于LPS组（P＜0.05）；肺组织中cPLA2的表达及磷酸化水平明显低于LPS组（P＜0.05）。事先腹腔注射育亨宾并不阻断小檗碱抗内毒素性肺损伤的作用，育亨宾与小檗碱联合应用组上述指标与LPS组比较均有显著性差异（P＜0.05）。结论1．育亨宾能明显增强小檗碱抗内毒素血症的作用，育亨宾与小檗碱联合应用明显减轻LPS引起的肝、肾、肺及肠道损伤，显著提高内毒素血症及脓毒症小鼠的生存率。2．小檗碱能显著降低内毒素血症小鼠血清TNF-α、NO的含量，升高IL-10及IFN-γ的水平，这些过程并不依赖于α2受体；但小檗碱阻断LPS引起的IL-1β的释放并促进IL-12的释放依赖于α2受体途径。育亨宾与小檗碱联合应用能显著降低内毒素血症小鼠血清TNF-α、NO的含量，升高IL-10、IFN-γ、IL-1β及IL-6的水平。3．小檗碱通过非α2受体依赖的途径抑制肺组织中cPLA2的磷酸化，降低TXB2水平，有效防治内毒素性肺损伤。这些结果说明小檗碱激活α2受体可能会削弱小檗碱对内毒素血症的防治作用，育亨宾阻断α2受体能调整小檗碱对内毒素血症小鼠细胞因子和炎症介质的影响，从而增强小檗碱对内毒素血症的防治作用。育亨宾与小檗碱联合应用可能是防治内毒素血症和脓毒症的有效措施。