论文摘要
研究背景胰腺癌是一种进展迅速的消化系统恶性肿瘤,5年存活率低于5%,手术切除率仅15%-20%。因此化疗在胰腺癌的治疗中具有极为重要的地位。吉西他滨是胰腺癌临床治疗的一线化疗药物,但由于患者对化疗反应存在个体化差异,故其临床疗效并不令人满意。脱氧胞苷激酶（deoxycytidine kinase, dCK）是吉西他滨等核苷类药物体内代谢过程中的关键酶,其活性直接影响到上述药物的化疗疗效。单核苷酸多态性（Single-nucleotide polymorphism, SNP）是指基因组DNA序列中频率大于1%的单个核苷酸的变异。位于基因非编码区和编码区的SNP可分别影响基因的表达和编码蛋白的合成,最终影响蛋白的活性和功能。现已证实化疗药物代谢酶基因的SNP改变是导致患者对化疗药物不同反应的原因之一。近年来,有学者发现dCK基因多态性及蛋白表达水平与核苷类药物的化疗敏感性密切相关。因此,本研究设计从不同来源人胰腺癌细胞株水平分析dCK基因多态性及蛋白表达与吉西他滨化疗敏感性间的关系,继而在胰腺癌临床患者中进行验证。以期建立通过dCK基因多态性及蛋白表达检测预测吉西他滨化疗疗效的方法,为胰腺癌患者的个体化化疗提供有效的预测指标。研究目的1.探讨胰腺癌细胞dCK基因多态性与吉西他滨化疗敏感性之间的关系；2.探讨胰腺癌细胞dCK蛋白表达水平与吉西他滨化疗敏感性之间的关系；3.探讨通过对胰腺癌患者dCK基因多态性及蛋白表达检测预测吉西他滨化疗疗效的可行性。实验方法第一部分,利用DNA提取试剂盒（QIAamp DNA minikits）提取6种人胰腺癌细胞株AsPC-1, BxPC-3, Mia PaCa2, SU86.86, SW1990, T3M4细胞的全DNA标本,PCR扩增目的片段后使用ABI3730XL基因分析仪进行dCK基因多态性检测；同时使用Cell Counting Kit-8 （CCK-8）试剂对上述细胞进行吉西他滨化疗敏感性检测,分析胰腺癌细胞dCK基因多态性与吉西他滨化疗敏感性间的关系；第二部分,在第一部分工作的基础上,各选取吉西他滨化疗敏感性不同的两组人胰腺癌细胞株（敏感组：BxPC-3, T3M4;不敏感组：AsPC-1, SW1990）,进行dCK蛋白表达western blot检测并比较其差异；转染dCK-siRNA下调BxPC-3和T3M4细胞中dCK蛋白表达后,使用CCK-8试剂进行吉西他滨化疗敏感性检测,分析胰腺癌细胞dCK蛋白表达与胰腺癌吉西他滨化疗敏感性间的关系；第三部分,对30例吉西他滨化疗的胰腺癌患者外周血细胞DNA标本进行dCK基因多态性检测,分析胰腺癌患者dCK基因多态性与吉西他滨化疗预后的关系；对43例吉西他滨化疗的胰腺癌患者肿瘤组织标本进行dCK蛋白免疫组化检测,分析胰腺癌患者dCK蛋白表达与吉西他滨化疗预后的关系。研究结果1.在AsPC-1, BxPC-3, Mia PaCa2, SU86.86, SW1990, T3M4细胞中,检测到dCK基因A9846G和C300T两个SNP位点的基因型突变。CCK-8药敏检测显示：9846AG基因型细胞（BxPC-3, T3M4）较9846GG基因型细胞（AsPC-1, Mia PaCa2, SU86.86, SW1990）对吉西他滨化疗的反应更为敏感（P<0.01）,300CT基因型细胞与300CC基因型细胞相比,吉西他滨化疗敏感性无显著性差异（P>0.01）；2.在AsPC-1, BxPC-3, SW1990, T3M4细胞中,dCK蛋白高表达组（BxPC-3和T3M4）较低表达组（AsPC-1和SW1990）的吉西他滨化疗敏感性更高（P<0.01）。使用dCK-siRNA下调BxPC-3和T3M4细胞中dCK蛋白表达后,BxPC-3和T3M4细胞的吉西他滨化疗敏感性明显下降（P<0.05）；3.30例胰腺癌患者中,dCK基因9846AA/AG基因型携带者较9846GG基因型携带者对吉西他滨化疗有更好的反应（P=0.057）；4.43例胰腺癌患者中,肿瘤组织dCK蛋白表达水平与患者的吉西他滨化疗预后呈正相关（P<0.05）,与年龄呈负相关（P<0.05）。结论1.胰腺癌细胞dCK基因A9846G SNP位点的基因型与吉西他滨化疗敏感性密切相关；2.胰腺癌细胞dCK蛋白表达水平与吉西他滨化疗敏感性呈正相关；3.通过检测胰腺癌患者外周血细胞dCK基因多态性表型或肿瘤组织dCK蛋白表达水平预测胰腺癌患者吉西他滨化疗疗效的方法,具有较好的临床应用前景。
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相关论文文献
- [1].阿糖胞苷代谢酶的单核苷酸多态性与其临床疗效的关系[J]. 内科理论与实践 2010(01)
- [2].脱氧胞苷激酶表达与慢性淋巴细胞白血病氟达拉滨耐药的相关性研究[J]. 中国实验血液学杂志 2010(01)
- [3].阿糖胞苷代谢关键酶基因在儿童恶性血液肿瘤中的表达[J]. 中国小儿血液与肿瘤杂志 2010(05)
- [4].阿糖胞苷代谢关键酶活性与大剂量阿糖胞苷治疗时药物血浓度关系研究[J]. 中国肿瘤临床 2010(13)