普萘洛尔治疗血管瘤机制的初步研究

论文摘要

目的1.观察普萘洛尔对体外培养脐静脉内皮细胞（HUVEC-12细胞）细胞毒及增殖的影响。2.通过VEGF/ERK的胞内信号转导途径,探讨普萘洛尔治疗血管瘤的分子机制。方法1.采用不同浓度普萘洛尔干预内皮细胞,光学显微镜下观察细胞形态学变化；四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组细胞细胞毒及增殖情况；蛋白质免疫印迹（western blot）法测定磷酸化ERK变化。2.采用不同浓度VEGF刺激内皮细胞,应用蛋白质免疫印迹（western blot）法测定磷酸化ERK变化,建立内皮细胞VEGF阳性系统。3.采用不同浓度普萘洛尔干预经VEGF刺激的内皮细胞,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组细胞细胞毒及增殖情况；蛋白质免疫印迹（western blot）法测定磷酸化ERK变化。4.在抑制剂干预研究中,应用ERK信号通路特异性抑制剂PD98059、普萘洛尔分别及联合处理经及未经VEGF刺激内皮细胞,观察内皮细胞细胞毒、增殖及磷酸化ERK的变化。结果1.普萘洛尔浓度在1-16ug/ml的范围内,对正常人血管内皮细胞安全、无细胞毒作用。2. VEGF在20ng/ml时内皮细胞磷酸化ERK表达最强,以此浓度建立内皮细胞VEGF阳性系统。3.与空白对照组相比,普萘洛尔对经VEGF刺激内皮细胞无细胞毒作用（P>0.05）；在普奈洛尔浓度为8-16ug/ml时能明显抑制内皮细胞的增值及磷酸化ERK表达（P<0.05）4.与空白对照组比较,PD98059能明显抑制经VEGF刺激的内皮细胞增殖和降低磷酸化ERK水平；普萘洛尔具有PD98059相似效应,普萘洛尔与PD98059可能具有协同作用。结论普萘洛尔治疗血管瘤的机制可能为通过抑制（?）VEGF诱导的内皮细胞的胞内ERK信号转导,从而促进血管瘤的消退。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 缩略词
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 主要仪器及试剂
• 2.1.1 主要仪器及耗材
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要试剂配制
• 2.2 实验方法及步骤
• 2.2.1 细胞传代及培养
• 2.2.2 细胞冻存
• 2.2.3 细胞复苏
• 2.2.4 细胞计数
• 2.2.5 普萘洛尔干预内皮细胞
• 2.2.6 建立内皮细胞VEGF阳性系统
• 2.2.7 普萘洛尔干预VEGF刺激的内皮细胞
• 2.2.8 PD98059干预
• 2.3 统计学方法
• 第三章 结果
• 3.1 普萘洛尔对内皮细胞影响的测定
• 3.2 VEGF对内皮细胞的影响及内皮细胞VEGF阳性系统的建立
• 3.3 普萘洛尔对经VEGF刺激的内皮细胞影响的测定
• 3.4 PD98059干预对内皮细胞影响的测定
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果目录