人肝细胞癌Huh7细胞中EP3受体不同亚型的鉴定及相关胞内信号转导通路的研究

论文摘要

研究背景:近年来的科学研究表明COX-2及其产物PGE2在许多肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用,PGE2是通过细胞膜表面的PGE2受体（EP受体）发挥作用的。EP受体为G蛋白偶联型受体,有四种亚型,分别为EP1、EP2、EP3及EP4,在人肝细胞癌都有表达。其中EP3受体有八种不同类型的亚型,不同的亚型介导着不同的细胞内信号转导途径。本实验通过对人肝细胞癌Huh7细胞中EP3受体亚型表达的研究,初步探讨EP3受体所介导的人肝细胞癌细胞增殖的细胞信号通路,为进一步研究PGE2影响肿瘤细胞生长的机制提供一定的基础。研究目的:鉴定人肝细胞癌Huh7细胞中EP3受体不同亚型的类型及其介导的细胞内信号转导途径,探讨EP3对人肝细胞癌发生发展的影响及相关分子机制。研究方法:1.细胞培养:人肝细胞癌细胞株Huh7按常规方法培养。2.应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测人肝细胞癌细胞株Huh7细胞中EP3mRNA的表达。3.应用细胞生长和活性测定（WST-1）实验检测EP3受体激动剂sulprostone对人肝细胞癌细胞株Huh7细胞增殖的影响。4.应用酶联免疫法测定人肝细胞癌细胞株Huh7细胞环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）的浓度。5.Sulprostone处理人肝细胞癌细胞株Huh7细胞后,提取蛋白,应用Western blot检测Akt、Erk等蛋白磷酸化水平的变化。研究结果:1.RT-PCR结果显示人肝细胞癌Huh7细胞中表达的EP3剪接体类型是EP3（5）。2.细胞生长和活性测定（WST-1）实验结果显示,1.0μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L EP3受体激动剂sulprostone作用24小时后,细胞增殖率分别增加34.47%、28.25%和46.2%。3.Sulprostone可显著增高细胞内cAMP浓度,1.0μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L sulprostone作用Huh7细胞后,胞内cAMP浓度分别为145.9 pmol/L、226.3 pmol/L和478.95 pmol/L,较对照组的98.78pmol/L明显增加。4.Western blot实验显示,sulprostone作用30 min可使Huh7细胞中Akt蛋白磷酸化水平增加27%,而Erk蛋白磷酸化水平降低16.4%。研究结论:人肝细胞癌Huh7细胞中,EP3受体表达的亚型是EP3（5）,EP3受体激动剂sulprostone可以促进Huh7细胞的增殖,通过EP3受体的介导促进胞内cAMP表达水平的增加,其机制可能部分涉及到Akt及Erk信号转导通路。

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、前言
• 四、材料与方法
• 五、实验结果
• 六、讨论
• 七、研究小结
• 八、参考文献
• 九、附录1:Genebank中EP3受体部分信息
• 十、致谢
• 十一、综述及参考文献