论文摘要
目的:提取人宫颈癌细胞（Hela）的线粒体DNA聚合酶γ（mitochondrial DNA polymerase, Polγ）,纯化后鉴定其纯度及活性,用于体外药物线粒体毒性分析。方法:运用离子交换层析等方法提取并纯化Hela细胞线粒体线粒体DNA聚合酶γ,并用Bradford法检测蛋白浓度,经SDS-PAGE检测蛋白纯度及相对分子量,Western-Blot验证蛋白,用α-32P-dTTP掺入法,液闪计数器进行放射性测量以确定DNA聚合酶γ的活性。结果:成功提取并纯化人宫颈癌Hela细胞的DNA聚合酶γ,经SDS-PAGE鉴定有一个大约140KD的亚基单位,Western-Blot证实为此酶。经过一系列层析,聚合酶γ可得到150倍的纯化,6%收率,酶的总活力为4.81ukat,比活力为36.17ukat/mg。结论: Hela细胞的Polγ通过离子交换层析法提取和纯化后活性较高,可用于体外药物对线粒体毒性的检测。