羊胎盘免疫调节因子调节BALB/c小鼠细胞免疫功能的实验研究

论文摘要

背景 羊胎盘免疫调节因子(Goat placental immunoregulating factors, GPIF)是健康成年山羊胎盘提取物,经实验证明,GPIF理化性质稳定,为小分子多肽混合物:生物活性评价表明它可使E—玫瑰花环结环率达到10%。为进一步验证该产品生物活性,为其申报提供科学的临床前实验依据,必须通过药效学实验证明。有研究表明,羊胎盘肽与人胎盘肽在生理功能方面有相似之处,人胎盘肽主要作为免疫调节剂发挥作用,因此对羊胎盘肽的药效学研究应依据免疫调节剂的评价标准进行。 研究目的和意义 根据《中华人民共和国新药临床前实验指导原则》,免疫调节药物调节免疫功能的实验应包括体外实验和体内实验两大部分,两者相结合才能正确反应药物的调节作用:研究证明,胎盘肽主要作用于T淋巴细胞从而增强其介导的细胞免疫功能,因此本课题以分子量10KD以下的GPIF为研究对象,旨在通过体外T淋巴细胞增殖实验、T淋巴细胞表面抗原分析及相应的体内实验,研究其对BALB/c小鼠细胞免疫功能的调节作用。 方法和结果 1.体外实验 1.1 建立适合于检测BALB/c小鼠T淋巴细胞增殖活力的MTT比色法 影响MTT实验的主要因素有细胞浓度、ConA浓度、细胞培养时间、加入MTT后的共培养时间。由此我们根据L9(3~4)正交表设计正交实验,筛选适合于检测BALB/c小鼠T淋巴细胞转化的MTT比色法的最佳实验条件:细胞浓度为10~5个/孔、刀豆蛋白浓度为5μg/mL、终止培养前4 h加入MTT、整个细胞培养过程应为48 h。重复性实验证明:MTT比色法重复性好,是检测BALB/c小鼠T淋巴细胞转化的稳定方法。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 前言
• 2 材料
• 2.1 实验动物
• 2.2 样品与试剂
• 2.3 主要仪器设备
• 3 方法
• 3.1 体外实验
• 3.1.1 适合于检测BALB／c纯系小鼠T淋巴细胞增殖的MTT法的建立
• 3.1.2 羊胎盘免疫调节因子对BALB／c小鼠脾T淋巴细胞增殖的影响
• 3.1.3 羊胎盘免疫调节因子对BALB／c小鼠胸腺T淋巴细胞增殖的影响
• 3.1.4 羊胎盘免疫调节因子对BALB／c小鼠T淋巴细胞表面抗原表达能力的影响
• 3.2 体内实验
• 3.2.1 羊胎盘免疫调节因子对免疫抑制小鼠T淋巴细胞增殖的影响
• 3.2.2 羊胎盘免疫调节因子对免疫抑制小鼠迟发型超敏反应的影响
• 3.2.3 羊胎盘免疫调节因子对免疫抑制小鼠T淋巴细胞表面抗原表达能力的影响
• 4 结果
• 4.1 体外实验
• 4.1.1 适合于检测BALB／c纯系小鼠T淋巴细胞增殖的MTT法的建立
• 4.1.2 羊胎盘免疫调节因子对BALB／c小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
• 4.1.3 羊胎盘免疫调节因子对BALB／c小鼠胸腺淋巴细胞增殖的影响
• 4.1.4 羊胎盘免疫调节因子对BALB／c小鼠T淋巴细胞表面抗原表达能力的影响
• 4.2 体内实验
• 4.2.1 羊胎盘免疫调节因子对免疫抑制小鼠T淋巴细胞增殖的影响
• 4.2.2 羊胎盘免疫调节因子对免疫抑制小鼠迟发型超敏反应的影响
• 4.2.3 羊胎盘免疫调节因子对免疫抑制小鼠T淋巴细胞表面抗原表达能力的影响
• 5 讨论
• 小结
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢