论文摘要
目的：（1）观察胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis，CIA）大鼠滑膜组织膜联蛋白1（annexin 1）、醛缩酶A（aldolase A）表达，探讨类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）的发病机制；（2）分析痹肿消汤对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织膜联蛋白1（annexin 1）、醛缩酶A（aldolase A）表达的影响，探讨痹肿消汤治疗RA的作用机理。方法：（1）采用牛Ⅱ型胶原（bovineⅡcollgen，BⅡC）混合完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant，CFA）皮下注射大鼠复制实验性关节炎动物模型。模型成功后随机分为两组，一组为痹肿消汤组（n=19，简称治疗组），灌服BZXD，另一组为CIA模型组（n=17，简称模型组），灌服等剂量蒸馏水。正常对照组（简称正常组，n=15）大鼠不作处理。（2）观察三组大鼠一般情况、关节炎指数积分、足爪肿胀度、发病率及肢体累及率观察、病理形态学改变。在免疫后第10天、15天、20天、25天、30天、35天、40天、45天分别记录大鼠关节炎指数积分；每周测体重及足爪肿胀程度；在免疫后第25天、35天、45天分批处死大鼠，用HE染色法观察各组踝关节病理形态学改变。（3）采用免疫印迹法（Western blotting）检测模型组、痹肿消汤组及正常组大鼠在不同时间点滑膜组织中annexin 1、aldolase A的表达，运用Imagetool 3.0灰度扫描软件对结果进行半定量分析，比较组间及组内差异，并将annexin 1、aldolase A的表达作直线相关分析。结果：1．CIA模型复制：采用BⅡC混合CFA皮下注射SD大鼠成功复制CIA模型，成功率达88.2％。（1）一般情况观察：模型组大鼠精神欠佳，饮食减少，平均体重较治疗组轻（P＜0.05），体毛欠光泽，后期可见毛发枯燥，治疗组未见以上情况。模型组大鼠于免疫后第3周、第4周、第5周、第6周体重增长较正常组缓慢（P＜0.05），第1周和第2周体重增长差异无显著性（P＞0.05）；治疗组大鼠于第5、6周体重增长较模型组明显，差异有显著性（P＜0.05），其余时间点差异不显著。（2）关节炎指数积分评定：CIA大鼠关节炎体征于免疫后8～10天开始出现。免疫后10d，模型组，治疗组的关节炎指数积分增加。模型组于免疫后25天关节炎指数积分达到高峰，30天开始下降；治疗组大鼠AI积分与模型组比较，在免疫后15天无明显区别，差异无显著性（P＞0.05），于25天左右达高峰，但仍较模型组低，差异有显著性（P＜0.05）。治疗组大鼠AI积分于20天、25天、30天、35天、40天、45天均明显低于模型组（P＜0.05）。（3）足爪肿胀度测量：模型组大鼠于免疫后第2周、第3周、第4周、第5周、第6周足爪肿胀较正常组明显（P＜0.05）；治疗组大鼠于第5周、第6周足爪肿胀较模型组减轻（P＜0.05），其余时间点差异无显著性。（4）病理组织学观察：正常大鼠滑膜组织未见明显的新生血管及炎症细胞浸润，模型组25天有明显血管增生、滑膜增厚，炎性细胞浸润、水肿，随着关节症状的加重，新生血管逐渐增多、血管扩张、充血，大量淋巴细胞浸润。治疗组滑膜组织可见少量新生血管及炎症细胞浸润，滑膜轻度增厚，于35d后可见新生血管减少，炎症减轻，滑膜变薄。痹肿消汤能减轻CIA关节滑膜损伤。2．各组大鼠滑膜组织annexin 1、aldolase A的表达（1）各组大鼠滑膜组织annexin 1表达：造模25天后，模型组滑膜组织annexin 1表达低于正常组（P＜0.05），随着免疫时间的延长，模型组滑膜组织annexin 1表达呈水平递减趋势，45天表达最低（P＜0.05，P＜0.05，P＜0.01）。痹肿消汤组annexin 1表达在各时间点明显均高于模型组（P＜0.05，P＜0.05，P＜0.01），在25天、35天、45天水平，annexin 1表达递增，45天接近于正常组水平。（2）各组大鼠滑膜组织aldolase A的表达：模型组大鼠滑膜组织aldolase A表达在25天、35天、45天水平递增，差异明显(（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01），aldolase A在各时间点的表达明显高于正常组及治疗组（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.011）。治疗组大鼠25天滑膜aldolase A表达低于正常组（P＜0.05），随着免疫时间的延长，治疗组滑膜组织aldolase A表达则逐渐下调（P＜0.05，P＜0.01），45天接近于正常组水平（P＞0.05）。（3）模型组与治疗组在各时间点annexin 1表达与aldolase A呈负相关。结论：1．以BⅡC混合CFA皮下注射SD大鼠能成功复制CIA动物模型。BZXD能明显改善CIA大鼠临床症状，减轻病变程度。2．在CIA病理过程中，随着关节炎症状加重，annexin 1表达下调，aldolase A表达上调，滑膜annexin 1与aldolase A表达呈负相关。提示annexin 1、aldolase A与RA滑膜病变密切相关。3．痹肿消汤可通过上调annexin 1表达，下调aldolase A表达来阻抑RA关节病变。
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