人凝血因子Ⅷ分离纯化工艺研究

论文摘要

人凝血因子Ⅷ（human coagulation factor Ⅷ, Ⅷ）是人血浆中一种非常重要的凝血因子,其缺失或缺乏会引起不同程度的甲型血友病——一种X连锁隐性遗传的出血性疾病,严重时甚至会危及患者的生命。甲型血友病是一种终生性疾病,目前仍没有根治的方法,只能通过输注FⅧ产品进行替代性治疗。只要能及时输注FⅧ产品,甲型血友病患者也能如正常人一般生活甚至参加激烈的体育运动。但是目前国内市场上的FⅧ产品严重不足,不能充分供给国内甲型血友病患者的使用,经常会出现断药的情况,危害国内患者的健康和生命安全。FⅧ是已有国家标准药,随着国内经济收入的逐年增长以及蛋白分离技术的飞速发展,国内已有少数几个厂家开始生产FⅧ产品,我们泰邦公司也开始开发FⅧ的分离纯化工艺,以期能为血友病患者提供更多安全、有效的药品。FⅧ分子结构复杂,分子量为330kDa,是一种较大的血浆蛋白分子。但在血浆中的含量仅为0.1-0.2μg/ml,半衰期约为12h,因此其提取技术非常困难。我们经过大量的实验数据摸索,以及生产规模放大试产,得出了一条较为可行的FⅧ生产工艺：以人新鲜冰冻血浆低温离心后冷沉淀为起始原料,用适量的肝素钠溶解液溶解,在适当的温度条件下降低溶解液pH,沉淀大部分的纤维蛋白原和纤维结合蛋白；离心收获上清液,进行6h有机溶剂／去污剂（solvent/detergent, S/D）病毒灭活；进行Toyopearl DEAE650M弱阴离子交换层析,先用洗涤液洗去大量的杂蛋白,然后用合适的洗脱液洗脱收集FⅧ；洗脱液经超滤透析后配制至适当的规格,进行冷冻干燥,冻干后制品经100℃30min干热灭活,得FⅧ成品。本工艺生产的FⅧ产品目前已经完成临床实验,临床实验结果良好,治疗后患者血液中FⅧ活性水平有明显升高,用药后10min　FⅧ:C达到161.89%,用药后1h达到112.98%；并且治疗后临床症状有较大改善,其改善率达到93%（其中优良31.6%,改善61.4%）。根据中国食品药品检定研究院的检验结果,本工艺生产的FⅧ产品多项指标均优于《中国药典》的最低标准规定,已有检测项目均高于《欧洲药典》的最低标准规定。送检三批产品复溶时间都不高于2min,仅为《中国药典》规定的1/15；比活性更是高达>41.7IU/mg蛋白,高于《中国药典》规定的41.7倍；抗A、抗B血凝素不高于1：4,仅为《中国药典》规定的1/16,；聚山梨酯-80残留量不高于6μg/ml,为《中国药典》规定的1/16,磷酸三丁酯残留量不高于3μg/ml,低于《中国药典》规定的1/3。与市售FⅧ产品的质量对比,本工艺生产的FⅧ产品各项质控指标均不低于市售产品水平。按照年投浆量300吨计算,本工艺每年可以生产200IU/瓶的FⅧ产品15万瓶,在创造产值5000万的同时,可以为血友病患者提供3000万IU的FⅧ,能极大的缓解国内用药紧张的局面。

论文目录

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• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 第一部分 前言
• 1 血友病
• 1.1 甲型血友病
• 1.2 乙型血友病
• 1.3 丙型血友病
• 1.4 血管性假血友病
• 2 人凝血因子Ⅷ（FⅧ）
• 2.1 FⅧ分子结构
• 2.2 凝血过程及FⅧ的作用
• 第二部分 FⅧ生产工艺研究
• 1 设计思路
• 1.1 原料
• 1.2 安全
• 1.3 质量
• 2 技术方案
• 2.1 初始生产工艺及研究
• 2.2 生产工艺及中试放大
• 3 工艺先进性
• 第三部分 工艺研究分析
• 1 主要研究内容及总结
• 1.1 生产用原材料研究总结
• 1.2 FⅧ生产工艺回收率总结
• 1.3 FⅧ生产工艺中病毒灭活研究总结
• 1.4 制剂处方工艺研究总结
• 1.5 质量研究试验总结
• 1.6 药物稳定性研究试验研究总结
• 1.7 样品临床试验研究总结及评价
• 2 国内外对比及数据
• 3 推动行业科技进步情况
• 4 存在问题
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录
• 学位论文评阅及答辩情况表