HBV YMDD自然变异的影响因素及其对核苷类药物抗病毒疗效的影响

论文摘要

背景 慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B，CHB）是一种难治性疾病，在此基础上可出现肝功能衰竭、肝硬化及肝细胞癌等多种预后不良的疾病。中国2005年《慢性乙型肝炎防治指南》中把慢性乙型肝炎治疗的总体目标设定为：“最大限制地长期抑制或消除HBV，减轻肝细胞炎症坏死及肝纤维化，延缓和阻止疾病进展，减少和防止肝脏失代偿、肝硬化、HCC及其并发症的发生，从而改善生活质量和延长存活时间”。为达到这一目标，规范的抗病毒治疗是最为重要的治疗手段。目前，核苷类药物已成为临床抗HBV治疗的重要手段，其中拉米夫定（LAM）上市最早，临床应用也最为广泛。但长期应用核苷类药物的后果则是HBV通过变异而对其产生耐药性，P基因逆转录功能区酪氨酸—蛋氨酸—天门冬氨酸—天门冬氨酸（YMDD）基序自然变异株（rtM204I／V）的出现对核苷类药物的合理应用提出了挑战，但目前尚无推荐的YMDD变异株定量检测方法。 本研究分为三部分：①三种常用HBV YMDD变异检测方法的评估；②HBV YMDD自然变异株的流行病学研究；③YMDD自然变异对核苷类药物（拉米夫定和阿德福韦）抗病毒疗效的影响。 第一部分 三种常用HBV YMDD变异检测方法的比较 目的 对目前临床应用较为广泛的三种YMDD变异株检测方法进行评估，筛选操作简便、易于临床开展的YMDD变异株检测方法。 方法 以105例拉米夫定治疗过程中出现表型耐药的慢性乙型肝炎患者血清、10例TNFα-308 SNP阳性人基因组DNA样本为研究对象，比较PCR产物直接测序法、探针特异性实时荧光PCR检测技术及引物特异性实时荧光PCR检测技术（扩增抗拒点变异检测系统）对混合变异株的检出能力。 结果 10例TNFα-308 SNP阳性人基因组DNA样本（野生模板与变异模板的比例固定为1∶1）通过PCR产物直接测序法均得到明确分型。105例拉

论文目录

• 缩写词
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 三种常用 HBV YMDD变异检测方法的比较
• 1. PCR产物直接测序法检测YMDD变异
• 1.1 技术原理
• 1.2 材料与方法
• 1.3 结果
• 1.4 结论
• 2. 探针特异性实时荧光PCR技术在HBV点突变检测中的应用
• 2.1 技术原理
• 2.2 PCR竞争抑制的检验
• 2.3 结果
• 2.4 结论
• 3. 引物特异性实时荧光PCR技术检测YMDD变异
• 3.1 技术原理
• 3.2 材料与方法
• 3.3 结果
• 3.4 结论
• 4. 讨论
• 参考文献
• 第二部分 HBV YMDD自然变异株的流行病学研究
• 1. 对象与方法
• 2. 结果
• 3. 结论
• 4. 讨论
• 参考文献
• 第三部分 YMDD自然变异对核苷类药物抗 HBV疗效的影响
• 1. 对象与方法
• 2. 结果
• 3. 结论
• 4. 讨论
• 参考文献
• 研究总结与进一步的工作打算
• 博士期间发表论文与获奖情况
• 综述 乙型肝炎病毒 YMDD变异的检测方法与临床应用
• 附录
• 致谢