乳酸菌拓扑异构酶gyrA基因突变与耐喹诺酮类药物的相关性

论文摘要

本研究是以内蒙古锡林郭勒牧区酸马奶中分离的23株菌株为研究对象,首先,通过形态学、生理生化鉴定、16S rRNA序列分析,结果表明23株试验菌株中,4株为Enterococcus raffinosus、3株为Enterococcus durans、3株为Enterococcus dispar、2株为Lactobacillus plantarum、2株为(?)Enterococcus villorum、2株为Enterococcus gallinarum、1株为Lactobacillus sake、1株为Lactobacillus casei、1株为Enterococcus pseudoavium,4株试验菌株不属于乳酸菌。通过生理生化特性研究和抑菌特性研究,可以发现试验菌株生长温度范围广、具有耐热性、耐酸性、耐盐性、部分菌株具有发酵二糖和分解淀粉的优良特性；并且对Escherichia coli、Enteritidis bacillus有不同程度的抑制作用,菌株HZ1、HZ15、HZ24、 HZ25、HZ26、HZ27、HZ28和NN1对(?)taphylococcus aureus也有不同程度的抑制作用。采用牛津杯法和试管两倍稀释法对19株乳酸菌进行了耐药性测定,发现19株乳酸菌对诺氟沙星和环丙沙星具有不同程度的耐药性,耐药率高达100%,最高的MIC值大于237.03μg/mL。试验通过对菌株DNA拓扑异构酶ⅡgyrA基因进行PCR扩增、测序,与敏感性大肠杆菌gyrA基因进行突变位点的比较,发现10株耐氟喹诺酮类抗菌药乳酸菌的gyrA基因位点发生突变,试验菌株HZ1、HZ15、HZ24、HZ25、NN、NN1、NN2、NN3、ZB和ZBQ的gyrA基因编码的氨基酸有10个位点发生突变,LD有11个氨基酸位点发生突变,HZ28、BB有14个氨基酸位点发生突变,证实试验菌株对喹诺酮类抗菌药产生的耐药性与菌体DNA拓扑异构酶ⅠI gyrA基因突变有直接关系。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 酸马奶的概述
• 1.1.1 酸马奶的起源和研究现状
• 1.1.2 酸马奶中的微生物组成
• 1.1.3 酸马奶的营养与医疗保健作用
• 1.2 乳酸菌的研究概况
• 1.2.1 乳酸菌的形态及结构
• 1.2.2 乳酸菌的生长条件及生化特性
• 1.2.3 乳酸菌的分布特点
• 1.2.4 乳酸菌的主要生理作用
• 1.2.5 乳酸菌的应用及其制品
• 1.2.6 乳酸菌的分类鉴定技术
• 1.3 喹诺酮类抗菌药
• 1.4 乳酸菌耐药性机理的研究进展
• 1.4.1 主动外排系统介导的耐药性
• 1.4.2 质粒介导的耐药性
• 1.4.3 拓扑异构酶基因突变介导的耐药性
• 1.5 本研究课题的目的与意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 菌株来源
• 2.1.2 标准菌株
• 2.1.3 质控菌株
• 2.1.4 培养基
• 2.1.5 试验试剂
• 2.1.6 PCR引物
• 2.1.7 主要仪器设备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 试验菌株的活化、纯化和保存
• 2.2.2 试验菌株的生物学特性研究
• 2.2.3 耐药菌株的筛选及敏感性试验
• 2.2.4 耐氟喹诺酮类试验菌株Ⅱ型拓扑异构酶QRDR基因突变的测定
• 3 结果与分析
• 3.1 乳酸菌的生物学特性
• 3.1.1 乳酸菌的菌落形态及细胞形态
• 3.1.2 试验菌株的生理生化试验结果
• 3.1.3 试验菌株对3株致病菌的抑菌特性
• 3.1.4 12株乳酸菌的16SrRNA鉴定结果
• 3.1.5 试验菌株的16SrRNA同源性分析
• 3.2 两种氟喹诺酮类药物对乳酸菌的抑菌直径
• 3.3 两种氟喹诺酮类药物对乳酸菌的最小抑菌浓度（MIC）
• 3.4 gyrA基因分析
• 3.4.1 乳酸菌DNA提取试验
• 3.4.2 乳酸菌gyrA基因的PCR扩增
• 3.5 试验菌株PCR产物测序
• 3.5.1 试验菌株gyrA基因QRDR的测序结果
• 3.5.2 试验菌株gyrA基因编码的氨基酸序列分析
• 4 讨论
• 4.1 乳酸菌的生物学特性
• 4.2 乳酸菌的耐药性
• 4.3 拓扑异构酶基因突变介导的耐药性
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 作者简介