细胞周期调控异常在HPV相关宫颈癌发病机制中的作用

论文摘要

目的:探讨p53蛋白功能失活与细胞周期调控异常在HPV相关宫颈癌发病机制中的作用;探讨p53Arg型和p53Pro型蛋白功能失活与细胞周期调控异常在HPV相关宫颈癌发病机制中的作用。方法:（1）对宫颈癌组织采用PCR方法检测HPV16 DNA,采用PCR-RFLP方法检测p53Arg72Pro基因多态性分布;（2）对HPV16阳性的宫颈癌组织采用免疫组化方法检测p53蛋白;（3）对p53蛋白阴性和弱阳性的宫颈癌组织采用免疫组化方法检测CyclinD1、Cdk4、磷酸化Rb及Ki-67（PI）表达;（4）Cyclin D1与Cdk4表达、Cyclin D1表达与Rb磷酸化的关系采用相关性分析;（5）对比p53三种基因型的宫颈癌组织中CyclinD1、Cdk4、磷酸化Rb及Ki-67表达差异;（6）对p53三种基因型的细胞株采用RT-PCR技术检测Cyclin D1、Cdk4的mRNA表达,对比p53三种基因型的细胞株中Cyclin D1、Cdk4的mRNA表达差异。结果:（1）宫颈癌组HPV16 DNA的阳性率为70.5%,明显高于对照宫颈组（P<0.05）;（2）对HPV阳性的100例宫颈癌组织检测p53蛋白,p53蛋白强阳性率为31.0%,阴性和弱阳性率为69.0%;（3）p53阴性和弱阳性的宫颈癌组织中CyclinD1表达、Cdk4表达、Rb高磷酸化率及PI值均高于对照宫颈组织,差异有统计学意义（P<0.05）;（4）Cyclin D1表达与Cdk4表达、Cyclin D1表达与Rb磷酸化率均有相关性, Rb高磷酸化组的PI值高于低磷酸组（P<0.05）;（5）在p53阴性和弱阳性的宫颈癌组织中,p53三种基因型的分布为p53Arg型组40.57%、p53 Pro型组23.18%、p53 Arg/Pro型组36.24%,在p53 Arg型和p53 Pro型的宫颈癌组织中CyclinD1, Cdk4表达和Rb磷酸化蛋白的含量无明显差异（P>0.05）;（6）CyclinD1和Cdk4 mRNA相对表达量在p53 Arg型和p53 Pro型细胞株中差异无显著性（P>0.05）。结论:（1）HPV阳性的宫颈癌组织中p53蛋白表达阴性或弱阳性,提示p53蛋白可能被E6蛋白降解或部分降解。（2）p53蛋白降解或部分降解后,宫颈癌细胞增殖活性增高主要通过Cyclin D1/Cdk4和Rb磷酸化途径。（3）p53Pro型组细胞增殖活性增高的调控除了CyclinD1/Cdk4和Rb（ser 795）磷酸化途径外,可能还有其他细胞周期调控机制参与。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略语表
• 前言
• 材料与方法
• 1 材料
• 2 方法
• 3 数据处理
• 结果
• 1 子宫颈癌与对照宫颈组织中HPV16 DNA 的检测
• 2 p53 Arg72Pro 多态性在宫颈癌及对照宫颈组织中的分布
• 3 p53、细胞周期蛋白和Ki-67在宫颈癌和对照宫颈组织中的表达
• 3.1 p53蛋白在宫颈癌与对照宫颈组织中的表达
• 3.2 宫颈癌与对照宫颈组织Cyclin D1、Cdk4、Ki-67 表达和Rb 磷酸化蛋白含量
• 3.3 Cyclin D1和Cdk4、Rb磷酸化蛋白含量相关性
• 3.4 Cyclin D1、Rb 磷酸化蛋白与细胞增殖活性的关系
• 3.5 Cyclin D1、Cdk4、Rb 磷酸化蛋白含量与宫颈鳞癌临床病理特征的关系
• 4 p53两种基因型的宫颈癌中细胞周期蛋白表达及细胞增殖活性
• 4.1 Cyclin D1 蛋白的表达
• 4.2 Cdk4蛋白的表达
• 4.3 Rb 磷酸化蛋白的含量
• 4.4 细胞增殖活性
• 5 p53三种基因型细胞系总RNA电泳鉴定结果
• 6 p53 三种基因型细胞系中CyclinD1、Cdk4 mRNA 的相对表达量
• 7 测序结果
• 8 实验所检目的基因部分序列（GENBANK）
• 8.1 p53 基因（U94788）
• 8.2 HPV 16 （AF534061）
• 讨论
• 1 HPV感染、p53蛋白及细胞周期调控蛋白表达与宫颈癌发生的关系
• 1.1 CyclinD1、Cdk4蛋白与宫颈癌
• 1.2 Rb磷酸化蛋白与宫颈癌
• 1.3 Ki-67与宫颈癌
• 1.4 宫颈癌中CyclinD1、Cdk4、Rb与细胞增殖活性的关系
• 2 宫颈癌组织p53 两种基因型中细胞周期蛋白及细胞增殖活性
• 3 p53两种基因型细胞株中CyclinD1、Cdk4 mRNA的相对表达量
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 文献综述
• 致谢
• 作者简历
• 导师评语