论文摘要
目的:掌握2005～2006年河北省流感流行情况;对新分离流感病毒株血凝素HA1基因进行核苷酸序列测定和氨基酸序列的推导,与最近流行代表株进行比较,及时发现流感病毒新变异株,为疫苗株选择等流感防治工作提供科学依据。方法:在2005年10月～2006年3月通过中国流感/禽流感监测信息系统,收集河北省5市12所流感监测哨点医院门诊就诊病例和流感样病例（ILI,influenza-like illness）监测数据,用Excel软件进行统计,分析ILI在人群中的流行变化趋势;将来自监测哨点医院和流感暴发疫情的咽拭子标本用狗肾传代（MDCK）细胞培养和分离流感病毒,用豚鼠红细胞和流感病毒标准参考血清进行鉴定分型。按照标本采集时间和分型鉴定结果,随机抽取流行前、中、后期分离到的甲1、甲3、乙型共9株以及流感暴发疫情中分离到流感毒株4株,利用RT-PCR方法扩增出HA1基因片断,对扩增产物进行核苷酸序列测定,用DNAStar软件与近年流感流行代表株进行序列比较,分析其核苷酸序列和氨基酸序列的同源性及变异情况,以及变异对流感病毒抗原性改变的意义。结果:（1） 12所流感监测哨点医院ILI就诊百分比为4.50%。内科门诊ILI就诊百分比为0.59%,就诊比最高的是2005年12月份,为0.85%。儿科门诊ILI就诊百分比为9.82%,就诊百分比最高的是2005年12月份,为11.25%。其中5岁以下儿童为主要发病人群,占ILI的55%（10914/19829）。与我省2004～2005年流行期接近。（2） 2005～2006年流行期河北省流感监测哨点医院采集ILI咽拭子标本938份,分离出流感病毒92株,经分型鉴定,H1N1亚型57株,H3N2亚型6株, B型29株。2006年4、5月份在石家庄、承德发生的2起流感暴发疫情中采集标本15份,分离出4株流感病毒,均为B型。（3）在流行期内出现了优势流行株的交叉更替,2005年10月～12月以甲1亚型为优势流行株,2006年2～3月份以乙型流感病毒为优势流行株,并且发生了乙型流感病毒引起的流感暴发疫情。（4）抽取的13株新分离流感病毒株利用特异性引物,采用RT-PCR方法分别扩增HA1区基因片断,均出现相应条带。（5）对扩增出的流感病毒HA1区基因片段进行核苷酸序列分析,与近年全国流感病毒流行代表株进行核苷酸、氨基酸序列同源性比较。3株H1N1亚型流感病毒与1999～2005年全国流行代表株A/New Caledonia/20/99的核苷酸序列同源性为97.0%～98.1%,氨基酸序列同源性为98.1%～98.7%,5～7个位点（173V>A 259W>R 260Y>F 281E>K 322V>A）氨基酸发生了替换,但均不在抗原决定簇上。3株H3N2亚型流感病毒与2005～2006年H3N2亚型疫苗株A/Calfornia/7/2004的核苷酸序列同源性为98.0%～98.2%,氨基酸序列同源性为98.7%～99.0%,3个位点氨基酸发生了替换,其中两个在抗原决定簇B区（188N>D、193S>F）,一个在受体结合位点（225D>N）。7株B型流感病毒属Victoria系,与Victoria系代表株B/HongKong/1131/2001核苷酸序列同源性为96.4%～96.8%,氨基酸序列同源性均为97.7%,7个位点发生了氨基酸替换,其中6个（80K>R、116R>H、121N>T、129K>N、164E>D、197S>N）参与抗原表位构成。结论:（1） 2005～2006年流感流行期河北省ILI就诊高峰为2005年12月至2006年1月,H1N1亚型、H3N2亚型和B型同时流行,并出现了H1N1亚型和B型优势流行的交叉更替。（2）新分离H1N1亚型毒株在基因特性上与疫苗株A/ New Caledonia/20/1999比较,HA1区已发生了氨基酸替换,但替换位点对HA1抗原性该改变意义不大。（3）新分离H3N2亚型毒株基因特性与疫苗株A/Calfornia/7/2004相近,但在HA1抗原决定位点发生了氨基酸替换。与2006～2007年疫苗株A /Wisconsin/67 /2005类似。（4）新分离B型毒株为Victoria系,与同期疫苗株B/Shanghai/361/2001不属同一系,与最近的Victoria系代表株B/HongKong/330/200相比基因变异程度较大。与2006～2007年疫苗株B/Malaysia/2506/2004类似。