东北梅花鹿染色体R-带和限制性内切酶显带的研究

论文摘要

目的:梅花鹿（Cervus nippon）隶属于偶蹄目,鹿科,鹿属。东北梅花鹿（Cervusnippon hortulorum）属国内仅存的三个亚种之一的东北亚种,具有很高的药用价值和保健价值。长久以来人们对东北梅花鹿的研究大多集中在理化性质、能量代谢、饲养管理以及疾病预防等领域,对东北梅花鹿的核基因和染色体领域研究得较少。本文通过对东北梅花鹿的R显带、限制性内切酶显带及其带型的分析和用扩增性片段长度多态（AFLP）对东北梅花鹿基因组DNA进行了亲缘关系的分析,为东北梅花鹿的细胞遗传学研究提供基础资料,为其染色体的高分辨G带和R带的相互关系提供一些证据,为后期用AFLP和原位荧光分子杂交（FISH）定位与产茸性状相关的基因奠定基础。方法:（1）锯茸时采茸血进行外周血细胞培养,68小时后加入过量胸腺嘧啶核苷（Thymidine,TdR）同步化细胞后洗脱TdR,加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-Bromodexyuridine,BrdU）启动细胞周期,收集细胞后结合RBG显带技术对东北梅花鹿染色体进行R显带并分析。（2）外周血细胞培养72小时后收集细胞,用限制性内切酶HaeⅢ和HindⅢ对染色体标本进行显带处理并分析显带结果。（3）耳静脉采血,用Zabeau和Vos等创建的方法稍作修改扩增了东北梅花鹿基因组DNA片段,并用相关软件对扩增结果进行了亲缘关系的分析。结果与结论:（1）R带的单套染色体共显带400条。根据Reading会议和家畜细胞遗传学国际命名体制,以试验结果为基础,绘制了东北梅花鹿R带模式图。（2）两条中部着丝粒染色体No1、No2,两条最长的端部着丝粒染色体No3、No4,性染色体X和最短的、也是唯一一个亚中部着丝粒染色体Y的R带和高分辨G带几乎完全是相反的,但宽窄有少许的不一致。除了No21、No24、No28末端浅染外,其它的末端都是深染的,同水鹿（Cervus unicolor）、越南梅花鹿（Vietnamesesika deer）的R带一样,Y染色体末端为深染,而绵羊（Ovis ariesl）和山羊（Capra hircus）R带中的Y染色体,其末端均为浅染,这正体现了同一物种内的稳定性和不同物种之间的差异性。（3）中期染色体经限制性内切酶HaeⅢ处理可显出类似G带和C带,C带除了在No1、No4、No11、No18、No27、No28、No31几对染色体和Y染色体染色较浅之外,其它染色体的C带的形态和大小与常规C带很相似,都能在着丝粒处显出深染。而HaeⅢ所显示的G带与常规G带比较,其带型不但反差减弱,而且带纹数量也相对要少一些,但与常规G带比较类似。中期染色体经限制性内切酶HindⅢ处理可显出G带和C带,C带除了No2、No6、No15、No18、No29、No32这几对染色体和X染色体染色较浅外,其余染色体的形态和大小与常规C带很相似,都能在着丝粒处显出深染。而HindⅢ所显示的G带与常规G带比较,除了带型反差减弱外,其带型与常规G带极为相似。（4）用AFLP技术扩增27头东北梅花鹿基因组DNA后,得出其片断的相似系数位于0.6809-0.8648之间,其平均值为0.7841。从永川采的C22与C20之间的相似系数最高,高达0.8648,C22与C20是父本和F1的关系,且父本C22为高产茸鹿,其子代F1C20的产茸量也明显比其他杂交组合的F1代要高。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 绪论
• 1.1 梅花鹿现状概述
• 1.2 国内外梅花鹿的研究现状
• 1.3 分子标记技术、基因定位和标记辅助选择育种
• 1.4 染色体显带方面的研究
• 1.5 本文研究的目的和意义
• 2 东北梅花鹿染色体R带研究
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 3 东北梅花鹿染色体限制性内切酶显带研究
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 4 东北梅花鹿 AFLP分子标记初探
• 4.1 实验材料
• 4.2 实验方法
• 4.3 结果
• 4.4 讨论
• 5 染色体显带技术与细胞遗传学的未来
• 参考文献
• 附:
• 1. 永川基地鹿茸比较
• 2 作者在攻读硕士学位期间的科研成果
• 3. 致谢