口腔鳞癌患者唾液中肿瘤标志物的表达及其机制研究

论文摘要

口腔鳞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤,虽然在治疗水平和治疗手段上已经取得了很大的进步,但5年生存率仍然只有50%～70%。早期发现、早期诊断和早期治疗是目前提高口腔鳞癌患者生存率和生活质量的关键所在。对于临床医师来说,除了常规的临床检查外,一些相关的临床辅助检查有助于实现早期发现和早期诊断。随着分子生物学和免疫学技术的不断进步,肿瘤标志物的研究也逐渐深入,尤其是与口腔鳞癌相关的肿瘤标志物的研究在口腔鳞癌的辅助诊断和预后监测上体现出潜在的临床应用价值。 唾液作为口腔内的一种体液,与口腔黏膜关系紧密,其中含有的口腔黏膜脱落细胞及其分泌代谢产物,尤其是肿瘤细胞对口腔鳞癌的临床诊断和预后监测可能具有一定的临床价值。唾液作为检测中介,具有取材安全无痛无创伤、操作简便、设备简单、可反复取材等特点,容易被患者接受。目前已有研究发现在口腔鳞癌患者唾液中可检测出与口腔鳞癌相关的肿瘤标志物的改变,如p53、p16、微卫星等,但对唾液中肿瘤标志物含量改变的机制研究较少。 Cyfra 21-1是细胞角蛋白19（CK19）的可溶性片段,而CK19是构成细胞骨

论文目录

• 缩写词表
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• 论文正文
• 背景
• 第一部分：CK19可溶性片段CYFRA21-1、CEA和端粒酶活性在口腔鳞癌患者唾液中的表达研究
• 一、前言
• 二、材料与方法
• 1 研究对象
• 2 研究方法
• 2.1 主要仪器、试剂和常用试剂的配制
• 2.2 唾液标本采集
• 2.3 标本处理
• 2.4 检测方法
• 2.4.1 唾液Cyfra 21-1和CEA的ELISA法检测
• 2.4.2 唾液端粒酶活性的TRAP-PCR-ELISA法检测
• 3 跟踪随访
• 4 统计学处理
• 三、结果
• 1 口腔鳞癌患者和对照组唾液中Cyfra 21-1的含量
• 2 口腔鳞癌患者和对照组唾液中CEA的含量
• 3 口腔鳞癌患者和对照组唾液中端粒酶活性的表达
• 4 口腔鳞癌患者唾液中Cyfra 21-1、CEA和端粒酶活性的相关性
• 四、讨论
• 第二部分：CK19可溶性片段CYFRA21-1和CEA在口腔鳞癌患者血清中的表达研究
• 一、前言
• 二、材料与方法
• 1 研究对象
• 2 研究方法
• 2.1 主要试剂和仪器
• 2.2 全血标本收集
• 2.3 标本处理
• 2.4 检测方法：ELISA法
• 3 跟踪随访
• 4 统计学处理
• 三、结果
• 1 口腔鳞癌患者和对照组血清中Cyfra 21-1的含量
• 2 口腔鳞癌患者和对照组血清中CEA的含量
• 3 口腔鳞癌患者唾液和血清中Cyfra 21-1、CEA检测结果的比较
• 四、讨论
• 第三部分：CK19和CEA在口腔鳞癌癌组织和癌旁组织中的表达研究
• 一、前言
• 二、材料与方法
• 1 研究对象
• 2 研究方法
• 2.1 主要试剂、仪器及常用试剂的配制
• 2.2 组织标本收集
• 2.2.1 用于免疫组织化学检测的标本收集
• 2.2.2 用于荧光实时定量RT-PCR检测的标本收集
• 2.3 检测方法
• 2.3.1 免疫组织化学检测方法
• 2.3.2 荧光实时定量RT-PCR检测方法
• 2.3.2.1 组织中总RNA抽提
• 2.3.2.2 紫外分光光度仪检测及定量
• 2.3.2.3 1％甲醛变性凝胶电泳检测RNA
• 2.3.2.4 cDNA的合成
• 2.3.2.5 荧光实时定量RT-PCR所需片段扩增引物和探针的设计和合成
• 2.3.2.6 PCR扩增条件确定
• 2.3.2.7 PCR扩增产物鉴定
• 2.3.2.8 荧光实时定量PCR检测
• 3 跟踪随访
• 4 统计学处理
• 三、结果
• 1 免疫组织化学结果
• 1.1 单克隆抗体作为一抗稀释倍数的确定
• 1.2 口腔鳞癌癌组织、癌旁组织和正常口腔黏膜组织中CK19表达情况
• 1.3 口腔鳞癌癌组织与癌旁组织中CK19表达情况的比较
• 1.4 口腔鳞癌癌组织、癌旁组织和正常口腔黏膜组织中CEA表达情况
• 1.5 口腔鳞癌癌组织与癌旁组织中CEA表达情况的比较
• 1.6 口腔鳞癌癌组织、癌旁组织和正常口腔黏膜组织中E-canherin表达情况
• 1.7 口腔鳞癌癌组织和癌旁组织中E-canherin表达强度差异
• 1.8 口腔鳞癌癌组织中E-canherin与CK19和CEA表达强度的关系
• 2 荧光实时定量RT-PCR检测结果
• 2.1 RNA鉴定
• 2.2 PCR扩增条件确定
• 2.3 PCR扩增产物的鉴定
• 2.4 荧光实时定量PCR结果
• 3 荧光实时定量RT-PCR检测CK19、CEA基因表达情况与免疫组织化学检测CK19、CEA蛋白表达情况的比较
• 4 口腔鳞癌组织中CK19、CEA的表达与血清、唾液中Cyfra 21-1、CEA检测的关系
• 四、讨论
• 全文结论
• 参考文献
• 综述一：唾液中肿瘤标志物在口腔鳞癌的研究进展
• 综述二：CYFRA 21-1肿瘤标志物在头颈部鳞癌诊断、预后评价中的作用
• 附录一：博士生在读期间发表的文章
• 附录二：博士生在读期间参加的学术会议
• 致谢