烟草内生放线菌Y12鉴定、培养及其发酵产物抑菌活性的初步研究

论文摘要

奉论文以湖南中医药大学谭周进教授课题组分离得到的烟草内生放线菌Y12为研究对象,分别对该菌株的分类地位,菌株发酵产物抑菌活性,发酵条件优化,发酵产物稳定性进行了研究,所得结果如下：1通过该菌的形态特征、培养性状、生理生化特征及16SrRNA测序进行综合实验分析,鉴定该菌与白浅灰链霉菌(streptomyces albogriseolus)最为接近。2对Y12发酵培养基的筛选、组成和发酵条件进行了优化,最终确定最佳发酵培养基为：黄豆粉1.5%,蛋白胨1.5%,葡萄糖1.5%,可溶性淀粉1.5%,硫酸镁0.05%,硫酸铵0.25%,氯化钠0.4%,磷酸二氢钾0.1%,碳酸钙0.5%。最佳发酵条件为：培养基初始pH值为7.5,发酵温度30℃,发酵时间72 h。经过优化发酵液的抑菌圈直径增加了44.9%。3抑菌试验结果表明,该菌发酵液对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacoarum)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtil is)的抑菌圈直径分别为28.1mm、29.2mm、22.8mm、20.3mm。连续培养l0代后,其发酵产物对以上几种菌的抑菌活性没有明显变化,有很好的遗传稳定性。4烟草内生放线菌Y12发酵产物的稳定性实验结果表明,该发酵产物的热稳定性较好,发酵产物在60℃温度水浴稳定性较好,30min后抑菌活性比率只下降了3.01%,90℃水浴30min后其活性比率下降了11.7%。100℃下水浴1h活性比率下降21.5%。在紫外光照射稳定性好,距离30cm在紫外灯下7h后其活性比率下降9.2%。该发酵产物在酸性条件下稳定性好,在pH为4时活性比率下降9.08%,在碱性环境下其活性下降比较明显,在pH为11时已经失去了抑菌活性。在常温下对时间的稳定性比较差,常温下8d后其活性比率为59.7%。研究结果显示,该菌发酵产物对酸、紫外线、热稳定性较好,常温下储存时间对该菌的稳定性有较大的影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 植物内生放线菌的研究概况
• 1.1 植物内生放线菌的多样性
• 1.1.1 植物内生放线菌寄主的多样性
• 1.1.2 植物内生放线菌分布在植物不同部位的多样性
• 1.1.3 植物内生放线菌的种类和次级代谢产物的多样性
• 2 近年来国内外农用抗生素的研究进展
• 3 研究目的、内容及意义
• 12分类地位的鉴定'>第二章 烟草内生放线菌菌株Y₁₂分类地位的鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 试剂
• 1.2 仪器
• 1.3 培养基
• 1.3.1 放线菌菌株培养基
• 1.3.2 培养特征培养基
• 1.3.3 测定生理生化特性培养基
• 12的培养特征的观察和生理生化特性的测定'>1.4 菌株Y₁₂的培养特征的观察和生理生化特性的测定
• 12培养特征的观察'>1.4.1 菌株Y₁₂培养特征的观察
• 12菌株生化特性的测定'>1.4.2 Y₁₂菌株生化特性的测定
• 1.5 放线菌DNA的提取（CTAB）
• 1.6 菌体16SrDNA序列的测定
• 2 结果与分析
• 2.1 生理生化特征
• 2.1.1 菌株对碳源的利用
• 2.1.2 其他部分生理生化特征
• 2.2 不同培养基上的培养特征
• 2.3 菌株16SrDNA和系统发育树分析
• 3 讨论
• 第三章 烟草内生放线菌发酵条件的优化
• 1 材料与方法
• 1.1 菌株
• 1.2 主要试剂、仪器和培养基
• 12种子摇液的制备'>1.3 Y₁₂种子摇液的制备
• 1.4 发酵培养基的选择
• 1.5 最佳发酵时间的选择
• 1.6 最佳发酵培养基pH值的选择
• 1.7 最佳发酵温度的选择
• 1.8 无菌发酵培养液的制备
• 1.9 拮抗实验
• 2 结果与讨论
• 2.1 培养基的选择及结果
• 2.2 发酵培养基的正交试验结果
• 2.3 培养时间对发酵的影响
• 2.4 起始pH值对发酵的影响
• 2.5 培养温度对发酵的影响
• 3 讨论
• 第四章 烟草内生放线菌发酵产物活性及稳定性初步研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 供试菌种
• 1.1.2 培养基
• 12种子摇液的制备'>1.2 Y₁₂种子摇液的制备
• 12发酵产物的制备'>1.3 Y₁₂发酵产物的制备
• 12发酵产物热稳定性实验'>1.4 Y₁₂发酵产物热稳定性实验
• 12发酵产物紫外线下稳定性实验'>1.5 Y₁₂发酵产物紫外线下稳定性实验
• 12发酵产物在不同pH下稳定性实验'>1.6 Y₁₂发酵产物在不同pH下稳定性实验
• 12发酵产物时间稳定性实验'>1.7 Y₁₂发酵产物时间稳定性实验
• 1.8 抑菌实验
• 2 结果与讨论
• 12发酵产物对细菌的作用'>2.1 Y₁₂发酵产物对细菌的作用
• 12发酵产物对细菌的作用'>2.2 10代后Y₁₂发酵产物对细菌的作用
• 12发酵产物活性热稳定性'>2.3 Y₁₂发酵产物活性热稳定性
• 12发酵产物活性在紫外线下的稳定性'>2.4 Y₁₂发酵产物活性在紫外线下的稳定性
• 12发酵产物活性时间的稳定性'>2.5 Y₁₂发酵产物活性时间的稳定性
• 12发酵产物活性在不同pH值下的稳定性'>2.6 Y₁₂发酵产物活性在不同pH值下的稳定性
• 3 结论
• 第五章 全文总结
• 1 结论
• 2 创新点
• 3 下一步工作设想
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 个人简介