雷公藤多甙联合丹参酮ⅡA对胶原诱导关节炎大鼠心血管损伤的保护作用及机制探讨

论文摘要

目的:类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种以关节破坏为主要表现的慢性系统性自身免疫病。近年来,随着免疫抑制剂和生物制剂的广泛应用,RA患者生存期不断延长,心血管并发症的发生率与死亡率呈不断上升的趋势。因此探讨RA合并心血管损伤的发病机理及防治措施成为RA临床治疗中亟待解决的重要问题之一,具有重要的临床意义。本课题拟通过观察雷公藤多甙（tripterygium glycosides,TG）联合丹参酮ⅡA（tanshinoneⅡA,TanⅡA）对胶原诱导关节炎（collagen-induced arthritis, CIA）大鼠血清肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、血管假性血友病因子（von Willebrand Factor,vWF）水平,离体血管内皮依赖性舒张功能和内皮素-1（endothelin-1,ET-1）所致收缩功能以及主动脉内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOs）和内皮素-1（endothelin-1,ET-1）蛋白表达的影响,探讨中药有效成分配伍对RA心血管损伤的保护作用及可能机制,为临床应用提供实验依据。方法:选择体重120-140g的Wistar大鼠,雌雄各半。测量双侧足爪厚度后常规消毒,于大鼠背部、尾根部、右足爪部多点注射鸡Ⅱ型胶原溶液,建立CIA大鼠模型。于造模14天相同方法进行第2次免疫。另取8只大鼠注入等量生理盐水作为空白对照组。每周测量关节炎指数（arthritis index,AI）。第21天将AI值大于5并出现2次反应的大鼠随机分为模型组、甲氨喋呤组（MTX组）、雷公藤多甙组（TG组）、雷公藤多甙+丹参酮ⅡA组（TG+ TanⅡA组）、丹参酮ⅡA组（TanⅡA组）,每组8只。当日测量大鼠体重,用游标卡尺测量各组大鼠足爪厚度。各治疗组连续灌胃给药（模型组灌胃给予等量生理盐水）27天,给药结束后第2天测量各组大鼠体重、足爪厚度,4%水合氯醛麻醉,腹主动脉取血,留取血清,ELISA法测定血清TNF-α、vWF。取血后立即打开胸腔,截取长为3-4mm的主动脉环,应用主动脉环浴皿法检测各组内皮依赖性舒张功能并分别给予浓度为3、10、20、40nmol/L的ET-1观察血管收缩功能的变化。剩余部分主动脉固定、脱水、包埋进行HE染色,用免疫组织化学法测定ET-1、eNOs的表达并进行半定量分析。统计学处理:所有数据均采用SPSS for windows 13.0软件包进行统计学处理,所得数据均以X±S表示,各组间均数比较采用单因素方差分析。结果:1 TG+ TanⅡA对CIA大鼠一般情况的影响造模21天后,除空白对照组外,各组大鼠背部、尾根部出现类风湿结节,AI值均大于5,造模侧与对侧足爪肿胀明显。各组体重明显低于空白对照组（P<0.01）,但MTX组、TG组、TG+TanⅡA组、TanⅡA组间无差异（P>0.05）;灌胃完毕,模型组、MTX组、TG组、TanⅡA组体重明显低于空白对照组（P<0.01）,TG+ TanⅡA组体重低于空白对照组（P<0.05）,其中模型组体重明显低于MTX组、TG组（P<0.01）,模型组体重与TanⅡA组无差别（P>0.05）,MTX组、TG组相比无差别（P>0.05）。2 TG+ TanⅡA对CIA大鼠足爪肿胀的抑制作用给药4周后,MTX组、TG+ TanⅡA组造模侧足爪平均肿胀度明显低于模型组和TanⅡA组（P<0.01）,TG组低于模型组和TanⅡA组（P<0.05）,MTX组、TG组、TG+ TanⅡA组比较无明显差异（P>0.05）,但TG+ TanⅡA组抑制率优于MTX组、TG组（46.44% VS 40.46%、33.90%）,TanⅡA组与模型组无明显差别（P>0.05）。MTX组、TG组、TG+ TanⅡA组非造模侧足爪厚度无明显差异,且均低于模型组和TanⅡA组（P<0.01）,但TG+ TanⅡA组抑制率优于MTX组、TG组（46.33% VS 42.30%、41.39%）。3 TG+ TanⅡA对CIA大鼠内皮依赖性舒张功能的影响CIA大鼠主动脉环给予乙酰胆碱（acetylcholine,Ach）后内皮依赖性舒张作用明显降低。与空白对照组相比,模型组,MTX组,TG组血管环应用Ach后对去甲肾上腺素（noradrenaline,NA）引起血管收缩反应的舒张率显著降低（P<0.01、0.05）, TG+ TanⅡA组、TanⅡA组与空白对照组比较无明显差别（P>0.05）。4 TG联合TanⅡA对ET-1所致离体血管收缩的拮抗作用空白对照组离体血管环给予小剂量ET-1（3nmol/L）可引起短时间收缩,继而引起血管舒张,舒张率为67.26±12.59%,TG+ TanⅡA组也有同样作用,舒张率为26.75±15.44%,其他组ET-1小剂量给药则无明显舒张作用。各组离体血管环在10、20nmol/L时收缩值持续增加达到高峰,10、20 nmol/L时模型组、MTX组、TG组与空白对照组有显著性差异（P<0.01）, TG+ TanⅡA组、TanⅡA组与空白对照组无差别（P>0.05）,但TG+ TanⅡA组作用优于TanⅡA组,MTX组、TG组在10、20nmol/L时收缩值均低于模型组（P<0.05）,40nmol/L时各组收缩值增加不明显。5 TG+ TanⅡA对CIA大鼠血清TNF-α、vWF变化的影响5.1 TG+ TanⅡA血清TNF-α的影响（Pg/ml）模型组、TanⅡA组水平明显高于空白对照组（P<0.01）,TanⅡA组水平低于模型组（P<0.01）。MTX组、TG组与TG+ TanⅡA组则与空白对照组无差异（P>0.05）,三者之中,TG+ TanⅡA组TNF-α水平最低（27.29±6.36）,TG组稍高于MTX组（36.50±14.88 VS 33.43±13.45）。5.2 TG+ TanⅡA对血清vWF的影响（mU/ml）模型组vWF水平最高,与空白对照组、MTX组、TG组、TG+ TanⅡA组、TanⅡA组差异具有显著性（P<0.01、0.05）,空白对照组、MTX组、TG组、TG+ TanⅡA组、TanⅡA组各组vWF水平无差异（P>0.05）,但TG+ TanⅡA组、TanⅡA组vWF水平稍低于MTX组、TG组。6动脉内皮HE染色及ET-1、eNOs表达的比较高倍镜下主动脉HE染色显示,模型组内皮连续性较差,并伴有脂质沉积,泡沫细胞形成,符合动脉粥样硬化第二期改变,MTX组、TG组、TanⅡA组仅有少量单核细胞聚集,TG+ TanⅡA组与空白对照组内皮完整,连续性好,无病理改变。ET-1半定量分析:模型组明显高于空白对照组,差异有显著性（P<0.01）,、MTX组、TG组、TanⅡA组高于空白对照组和TG+ TanⅡA组（P<0.05）,空白对照组、TG+ TanⅡA组相比无明显差异（P>0.05）;eNOS半定量分析:模型组、MTX组、TG组、TanⅡA组明显低于空白对照组（P<0.01）,模型组低于MTX组、TG组、TanⅡA组（P<0.05）,空白对照组、TG+ TanⅡA组相比无明显差异（P>0.05）。结论:1、CIA大鼠存在心血管损伤的相关因素,CIA大鼠血清TNF-α、vWF水平升高,离体主动脉内皮依赖性舒张功能明显下降并且对ET-1敏感性增高,主动脉内膜连续性差,泡沫细胞形成,主动脉eNOS表达减少而ET-1表达增强。2、雷公藤多甙联合丹参酮ⅡA具有抗炎增效作用,两者联合可明显降低CIA大鼠足爪厚度及血清TNF-α含量,抗炎作用较单用甲氨蝶呤和雷公藤多甙为优。3、丹参酮ⅡA对CIA大鼠血管内皮损伤具有保护作用,并可提高CIA大鼠主动脉内皮依赖性舒张作用,降低主动脉对ET-1的敏感性。4、雷公藤多甙联合丹参酮ⅡA对CIA大鼠心血管保护作用的机制与其降低血清细胞因子TNF-α和vWF水平、拮抗ET-1生物学效应、上调主动脉eNOS表达和下调ET-1表达有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 雷公藤多甙联合丹参酮ⅡA 对胶原诱导关节炎大鼠心血管损伤的保护作用及机制探讨
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 传统因素与非传统因素对类风湿关节炎心血管损伤的作用
• 致谢
• 个人简历