放线菌M34菌株及其发酵液抗菌活性物质的初步研究

论文摘要

本研究以华中农业大学狮子山的土样中所分离得到的一株抗植物病原菌的放线菌M34为研究对象,对该菌株的分类、发酵液的抗菌活性和稳定性及抗菌物质的初步鉴定进行了研究,主要结果如下:1.通过对M34菌株的形态观察、培养特征和生理生化特征的研究,初步得出M34菌株属于放线菌的灰褐类群。2.抑制菌丝生长生测结果表明,M34菌株发酵液在测定的13种供试真菌中,对玉米小斑病菌(Bipolaria maydis)和油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)的抑制效果最好,分别达到93.2%和90.3%;对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、棉花炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)的抑制率都在80%以上;对甘蔗凤梨病菌(Thielaviopsis paradoxa)、小麦赤霉病菌(Gibberella zeae)、草莓灰霉病菌(Botrytis cinerea)、苹果青霉病菌(Penicillium italicum)的抑制率都在70%以上。管碟法生测结果表明M34菌株在31℃,36h的发酵液对根癌土杆菌(Agrobacterium tumefaciens)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、都有明显的抑菌作用,其抑菌圈直径分别为31 mm、23 mm,而对苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensi)、甜豌豆带化菌(Rhodococcus facians)、发根土杆菌(Agrobacterium rhizogens)的抑菌作用不强,抑菌圈直径只有17 mm、15 mm、12 mm,而对花生青枯菌(Ralstonia solanacearum)则没有抑菌作用。盆栽试验表明M34菌株发酵液对油菜菌核病(Sclerotinia sclerotiorum)有一定的保护和治疗作用,防治效果分别为76.01%和55.13%。3.稳定性研究结果表明:M34菌株经连续10次转管培养后,其第10代的抑菌圈直径比出发菌株减少了37.5%(9 mm),可见其传代稳定性一般。其发酵液的活性成分对热不稳定,70℃时加热30 min时其抑菌圈直径减小8.9%,活性有明显的下降。其有效成份对酸碱不稳定,在pH值6～8范围以外,常温条件下,其活性有较明显的下降;对紫外光有较强的稳定性。4.经典的pH纸层析和纸电泳实验结果表明,初步判断M34菌株发酵液中有效成分为中性化合物。萃取试验表明M34发酵液中抗菌活性物质极性较强,Doskochilova溶剂系统纸层析结果表明,M34菌株发酵液产生的抗菌活性物质的纸层析图谱与放线菌素类抗生素的图谱近似。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 国内外农用抗生素的研究现状
• 1.1.1 国内研究概况
• 1.1.2 国外研究概况
• 1.2 抗生素杀菌剂在我国农业生产中的应用
• 1.2.1 春雷霉素（Kasugamycin）
• 1.2.2 多抗霉素（Polyxin）
• 1.2.3 公主岭霉素（Gongzhulingmycin）
• 1.2.4 井冈霉素（Jinggangmycin）
• 1.2.5 中生菌素（Zhongshengmycin）
• 1.2.6 其他农业用途
• 1.3 抗生素提取和分离方法的研究
• 1.3.1 有效成分分离原理
• 1.3.2 发酵液的预处理
• 1.3.3 分离纯化
• 1.4 放线菌分类的研究进展
• 1.4.1 放线菌的经典分类
• 1.4.2 放线菌的现代分类
• 1.5 研究目的、内容及意义
• 第二章 材料和方法
• 2.1 菌种和材料
• 2.1.1 供试菌株
• 2.1.2 供试病原菌
• 2.1.3 培养基
• 2.1.4 主要仪器
• 2.1.5 试验试剂
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 菌株M34的形态观察
• 2.2.2 菌株M34的培养特征的观察和生理生化特性的测定
• 2.2.3 16SrDNA的鉴定
• 2.2.4 菌株M34发酵液抑菌活性的测定
• 2.2.5 稳定性测定
• 2.2.6 发酵液抗菌活性物质的初步鉴别
• 第三章 结果与分析
• 3.1 菌株M34的分类鉴定
• 3.1.1 菌株M34的形态观察
• 3.1.2 菌株M34的培养特征和生理生化特征
• 3.2 发酵液的抗菌活性测定
• 3.2.1 菌株M34发酵液抑制菌丝生长作用
• 3.2.2 发酵条件的初步优化
• 3.2.3 菌株M34发酵液的抑菌活性
• 3.2.4 蚕豆叶试验
• 3.2.5 菌株M34的发酵对油菜菌核病的盆栽试验结果
• 3.2.6 发酵液稳定性测定
• 3.2.7 活性物质的初步鉴定
• 第四章 讨论
• 参考文献
• 致谢