鲍鱼蛋白多糖的降解、脱蛋白及活性研究

论文摘要

鲍鱼性腺蛋白多糖AGP具有多种生物活性,本文采用酸降解和β消去两种手段对该多糖进行化学处理,结合生物活性检测,来研究多糖组分、结构与生物效应的相互关系,为鲍鱼性腺多糖新产品的研发提供一定的理论基础。首先,本文采用β消去法,对AGP进行不同程度的脱蛋白处理,制备系列具有不同蛋白含量的多糖。结果显示,随着β消去反应时间的延长,蛋白含量逐渐减少,72 h后蛋白脱除效率接近平台,样品中的蛋白含量由原来的6.48%降到1.68%。柱层析色谱和红外光谱表明β消去反应基本不影响多糖的分子量、分子结构和支链组成。比较了AGP及β消去所得系列脱蛋白产物的生物活性,结果显示,脱蛋白产物的促淋巴细胞增殖活性及对tBOOH致细胞氧化应激的保护作用均有所下降,蛋白含量越低,活性下降越明显；相反,脱蛋白产物的补体抑制活性及Hela细胞增殖抑制活性均有一定提高,而且后者活性的提高与蛋白含量的降低具有较高相关性,p消去72 h所得样品的肿瘤抑制率提高到原来的2倍。其次,本文还采用稀酸法对AGP进行降解,在0.1 mol/L的HCl溶液中,通过控制酸处理时间0.5 h-4 h,制备得到系列寡聚糖样品。采用液相色谱法、柱层析法和粘度法对其分子量及分布进行鉴定。发现,随着降解时间的延长,降解产物的分子量逐渐降低,分子量分布变窄,2h左右趋于平稳；还发现,酸降解能够破坏多糖糖链中的硫酸根官能团,酸处理1.5 h后硫酸根基本全部消失,并新生成大量羟基。通过考察降解产物对淋巴细胞增殖、补体活性、RAW 264.7细胞增殖及NO生成水平、tBOOH致细胞氧化应激和Hela细胞体外增殖的改变,来探讨降解行为对鲍鱼性腺多糖活性的影响。结果显示,降解前后上述生物活性变化显著,在降解1 h-1.5 h左右呈现一个活性变化拐点,说明分子量降低以及硫酸根的脱除对生物活性有很大影响,降解1.5 h以后由于大量羟基的生成,活性反而有一定程度的提高。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 前言
• 1.2 寡聚糖的研究进展
• 1.2.1 寡聚糖的生物活性
• 1.2.1.1 免疫调节作用
• 1.2.1.2 营养保健功能
• 1.2.1.3 抗病毒活性
• 1.2.1.4 抗凝血活性
• 1.2.1.5 抗炎活性
• 1.2.1.6 抗肿瘤活性
• 1.2.2 多糖降解制备寡糖的方法
• 1.2.2.1 酸降解法
• 1.2.2.2 氧化降解法
• 2降解法'>1.2.2.3 NaNO₂降解法
• 1.2.2.4 生物酶降解法
• 1.2.2.5 超声降解法
• 1.2.2.6 微波降解法
• 1.3 活性多糖的构效关系研究
• 1.3.1 单糖组成对多糖活性的影响
• 1.3.2 主链构型及链接方式对多糖活性的影响
• 1.3.3 支链性质对多糖活性的影响
• 1.3.4 分子量大小对多糖活性的影响
• 1.3.5 理化性质对多糖活性的影响
• 1.3.6 蛋白含量对多糖活性的影响
• 1.4 研究目的及意义
• 1.5 本课题主要研究内容
• 第二章 不同蛋白含量鲍鱼多糖的制备及活性研究
• 2.1 前言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 实验原料
• 2.2.2 实验试剂和药品
• 2.2.3 主要实验设备
• 2.2.4 鲍鱼性腺多糖的制备
• 2.2.5 β消去反应制备不同蛋白含量的样品
• 2.2.6 红外光谱分析
• 2.2.7 样品组成分析
• 2.2.8 分子量分布测定
• 2.2.9 对淋巴细胞增殖活性的影响
• 2.2.10 对经典途径补体活性的影响
• 2.2.11 对tBOOH致细胞氧化应激的保护作用
• 2.2.12 对Hela细胞体外增殖的影响
• 2.2.13 统计学分析
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 红外光谱分析结果
• 2.3.2 样品组成分析结果
• 2.3.3 分子量分布测定结果
• 2.3.4 β消去产物对淋巴细胞增殖活性的影响
• 2.3.5 β消去产物对经典途径补体活性的影响
• 2.3.6 β消去产物对tBOOH致细胞氧化应激的保护作用
• 2.3.7 β消去产物对Hela细胞体外增殖的影响
• 2.4 本章小结
• 第三章 稀酸法降解鲍鱼多糖及活性研究
• 3.1 前言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 实验原料
• 3.2.2 实验试剂与药品
• 3.2.3 主要实验设备
• 3.2.4 鲍鱼性腺多糖的制备
• 3.2.5 稀酸降解制备不同分子量鲍鱼性腺寡聚糖
• 3.2.6 分子量分布测定
• 3.2.7 降解产物特性粘度的测定
• 3.2.8 红外光谱分析
• 3.2.9 对淋巴细胞增殖活性的影响
• 3.2.10 对经典途径补体活性的影响
• 3.2.11 对RAW 264.7细胞增殖及NO生成水平的影响
• 3.2.12 对tBOOH致细胞氧化应激的保护作用
• 3.2.13 对Hela细胞体外增殖活性
• 3.2.14 统计学分析
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 分子量分布测定结果
• 3.3.2 特性粘度变化测定结果
• 3.3.3 红外光谱分析结果
• 3.3.4 酸解产物对淋巴细胞增殖活性的影响
• 3.3.5 酸解产物对经典途径补体活性的影响
• 3.3.6 酸解产物对RAW 264.7细胞增殖活性的影响
• 3.3.7 酸解产物对RAW 264.7细胞生成NO水平的影响
• 3.3.8 酸解产物对tBOOH致细胞氧化应激的保护作用
• 3.3.9 酸解产物对Hela细胞体外增殖的影响
• 3.4 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录