胶质细胞源性神经营养因子在大鼠神经痛及电针镇痛中的作用及其机制研究

论文题目: 胶质细胞源性神经营养因子在大鼠神经痛及电针镇痛中的作用及其机制研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 中西医结合基础

作者: 董志强

导师: 吴根诚,王彦青,李为民

关键词: 神经痛,电针镇痛,基因治疗

文献来源: 复旦大学

发表年度: 2005

论文摘要: 神经痛是最常见的慢性病理性疼痛之一,是由创伤或疾病致外周或中枢神经受损所引起的异常的疼痛状态。有关神经痛产生的外周和中枢机制一直是近年来痛觉研究的热点之一。国内外大量的研究表明,许多外周和中枢结构及多种化学物质参与了神经痛的形成及调制过程。然而,目前对神经痛的确切发病机制所知仍少。临床上用阿片类等药物来控制神经痛的效果也不很理想,并有众所周知的副作用。所以,神经痛的治疗一直是临床上的一大难题。而在这方面,针刺疗法和针刺研究是大有可为的。针刺是一种有效而副作用极少的治疗神经痛的手段,这一点在国内外临床及动物实验中均得到证实。但由于神经痛发生机制及治疗的复杂性,针刺抗神经痛的机制还有许多问题未搞清楚。 胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)是1993年从大鼠神经胶质瘤细胞株B49中发现并提纯的一种神经营养因子。GDNF在外周和中枢神经系统广泛分布,对多种神经元具有营养、保护和促损伤后修复作用。GFRα-1是GDNF特异性、高亲和力受体。GDNF与GFRα-1结合后,通过酪氨酸激酶受体RET,激活细胞内信号转导途径。近来,越来越多的证据表明GDNF可能在痛觉信号的传导与调制中起重要作用,并且很可能在神经痛中起作用。然而,对于GDNF及其受体在神经痛时的表达变化及其在神经痛中的作用,目前尚不明确。已有研究表明,脑内GDNF可能参与了电针对大鼠帕金森病的治疗作用。那么,内源性GDNF及其受体系统是否也在电针抗神经痛中起作用呢?另有证据表明,外源性给予GDNF可以提高大鼠背根神经节(DRG)中生长抑素(SOM)的表达,并且促进SOM在脊髓背角的释放。那么GDNF及其受体在神经痛及电针镇痛中的作用是否与内源性SOM有关呢?总之,揭示GDNF在神经痛过程中的作用,阐明针刺抗神经痛的GDNF机制,这是本研究需要解决的主要内容。 此外,已有研究表明脊髓蛛网膜下腔给予外源性GDNF对大鼠神经痛有很强的镇痛作用,但一方面由于GDNF价格昂贵,另一方面GDNF作为多肽,外源性系统给药也会遇到许多困难,所以目前难以在临床上实际应用。能否通过转基因技术,将可以高效表达、分泌GDNF活性蛋白的细胞株移植到体内来治疗神经痛呢?在动物实验中,如何更好地使外来细胞株在动物体内存活、增殖,一直是基因治

论文目录:

英文缩写词表

中文摘要

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前言

材料与方法

1.材料

2.方法

2.1 神经痛大鼠模型

2.2 测痛方法

2.3 电针方法

2.4 假电针方法

2.5 鞘内插管与给药

2.6 组织切片的制备

2.7 免疫组织化学法(ABC法)

2.8 寡聚核苷酸探针的标记

2.9 寡聚核苷酸标记探针的检测

2.10 原位杂交组织化学法(漂浮法)

2.11 Western Blot

2.12 总RNA提取(Trizol一步法)

2.13 逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)

2.14 质粒的扩增、抽提与纯化

2.15 重组逆转录病毒的包装

2.16 大鼠成纤维细胞原代培养

2.17 逆转录病毒感染成纤维细胞

2.18 经基因修饰成纤维细胞鞘内移植

2.19 统计分析

2.20 有关溶液的配制

结果

1.多次电针对大鼠神经痛的治疗作用

2.DRG和脊髓背角GDNF及GFRα-1在大鼠神经痛不同时程及电针镇痛时的表达变化

2.1 DRG中GDNF及GFRα-1蛋白在大鼠神经痛不同时程及电针镇痛时的表达变化

2.2 脊髓背角GDNF及GFRα-1蛋白在大鼠神经痛不同时程及电针镇痛时的表达变化

2.3 DRG中GDNF及GFRα-1 mRNA在大鼠神经痛不同时程及电针镇痛时的表达变化

3.应用反义寡核苷酸技术封闭GFRα-1表达对大鼠神经痛及电针镇痛的作用

3.1 脊髓蛛网膜下腔给予针对GFRα-1的反义寡核苷酸对DRG和脊髓背角GFRα-1表达的影响

3.2 封闭内源性GFRα-1的表达对大鼠神经痛的作用

3.3 封闭内源性GFRα-1的表达对电针抗神经痛的作用

4.GDNF及其受体在神经痛及电针镇痛中的作用与内源性SOM的关系

4.1 DRG和脊髓背角SOM在大鼠神经痛不同时程及电针镇痛时的表达变化

4.2 封闭内源性GFRα-1的表达对DRG和脊髓背角SOM表达的影响

4.3 封闭内源性GFRα-1表达后，电针对DRG和脊髓背角SOM表达的影响

5.脊髓蛛网膜下腔移植GDNF基因修饰的成纤维细胞对大鼠神经痛的治疗作用及其与针刺疗法合用的疗效观察

5.1 重组逆转录病毒表达载体pLNCX2-GDNF的酶切鉴定

5.2 重组逆转录病毒表达载体pLNCX2-GDNF的序列测定

5.3 大鼠皮肤成纤维细胞原代培养

5.4 GDNF在转基因成纤维细胞中的表达

5.5 转基因成纤维细胞在大鼠体内的存活鉴定

5.6 基因修饰成纤维细胞移植对大鼠神经痛的治疗作用

5.7 基因修饰成纤维细胞移植与电针合用对大鼠神经痛的治疗作用

讨论

结论

参考文献

附录：论文写作与发表

致谢

综述

发布时间: 2005-09-19

参考文献

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