论文摘要
草地早熟禾（Poa pratensis L．）属冷季型草坪草，是温带地区重要的草种之一。由于它具有色泽美、抗寒能力强、耐荫、耐修剪等优点，在我国北方地区多被用作建坪草种之一。但草地早熟禾易受多种真菌感染，其病害的发生和蔓延，轻者可使草坪褪绿、黄化，形成枯死斑块，影响观赏和利用价值；重者可使整块草坪迅速衰败，难以利用。因此，培育具有广谱抗病性能的草地早熟禾新品种具有重要的意义。本研究以草地早熟禾品种超级伊克利（Poa pratensis L．cv．Total eclipse）的成熟种子为外植体材料，在对草地早熟禾转化再生体系进行优化的基础上，采用农杆菌介导法将来源于黑曲霉的葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase，GO）基因导入草地早熟禾，并由筛选出的卡那霉素抗性愈伤组织分化再生植株。对所得到的卡那霉素抗性植株进行PCR和RT-PCR分析，利用淀粉-碘化钾反应和TiCl4-PAR比色法测定转基因植株体内的过氧化氢（Hydrogen peroxide，H2O2），以此来检测葡萄糖氧化酶基因的表达。对所得到的转基因草地早熟禾植株人工接种冠锈菌夏孢子进行抗病性鉴定并测定了抗病性相关指标。结果如下：1．附加2，4-D 2.0mg／L和BAP 0.2mg／L激素组合的诱导培养基是诱导超级伊克利成熟胚愈伤组织发生较为适宜的培养基，愈伤组织诱导频率达30％～43％。附加2，4-D 1.0mg／L和BAP 0.5mg／L的愈伤组织继代培养基是超级伊克利成熟胚愈伤组织继代培养适宜的培养基，在愈伤组织分化培养基中附加2.0mg／L BAP或CPPU，经继代培养3代的愈伤组织的绿苗分化率保持在30％左右。2．PCR检测结果表明外源葡萄糖氧化酶基因已整合到草地早熟禾基因组中，RT-PCR分析结果表明葡萄糖氧化酶基因已经在转录水平得到表达。H2O2的定性和定量检测结果证实葡萄糖氧化酶基因在翻译水平上表达。3．人工接种冠锈菌夏孢子后，转基因植株对冠锈病具有良好的抗性，其抗病性相关指标也较对照非转基因植株有所增加。