诱导型一氧化氮合酶基因调节蛋白的筛选及调节蛋白XBP1功能和启动子活性研究

诱导型一氧化氮合酶基因调节蛋白的筛选及调节蛋白XBP1功能和启动子活性研究

论文摘要

研究目的真核细胞中一氧化氮(NO)作为第二信使和神经递质发挥着多种不同的功能,具有广泛的生物学效应和抗病毒作用,参与机体的多种生理及病理过程,其对疾病发生及发展的影响是近年来研究的热点。诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)是产生一氧化氮的限速酶,广泛分布于机体内,一切影响iNOS活性的因素及影响iNOS基因转录、翻译的因素都会影响一氧化氮的生成,其中iNOS基因转录过程的调控是一氧化氮产量控制的主要因素。本研究首先运用噬菌体表面展示技术筛选出12种iNOS基因的调节蛋白,X-盒结合蛋白1(X-box binding protein1,XBP1)是其中一种iNOS基因的调节蛋白,他是CREB/ATF家族一个重要的转录因子,通过与真核基因启动子区域中顺式作用元件发生特异性相互作用、或者与其他相关蛋白质之间发生相互作用,激活或抑制转录,调节基因的表达,并通过整合这些不同的调节机制,激发无数基因的表达模式。为揭示真核细胞中iNOS基因的转录调控机制、反式作用因子XBP1对iNOS基因的调节作用,我们进一步针对筛选出的调节蛋白XBP1进行生物学功能的初步研究,对XBP1进行细胞内定位;筛选和构建XBP1与其他蛋白质间相互作用的连锁图,为阐明XBP1基因和iNOS基因的转录调节机制提供实验依据,为进一步揭示NO在肝细胞中的信号传递机制奠定理论基础。研究方法

论文目录

  • 英汉缩略语名词对照
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 论文正文:诱导型一氧化氮合酶基因调节蛋白的筛选及调节蛋白XBP1 功能和启动子活性研究
  • 第一部分 诱导型一氧化氮合酶基因调节蛋白的筛选与研究
  • 第一节 iNOS 基因报告载体的构建和活性检测
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 第二节 应用噬菌体展示技术筛选iNOS 基因启动子结合蛋白
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 第二部分 转录因子XBP1 对iNOS 基因调节作用的研究
  • 第一节 XBP1 真核表达载体的构建与表达
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 第二节 XBP1 下调iNOS 启动子转录活性的研究
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 第三部分 调节蛋白XBP1 功能和启动子活性研究
  • 第一节 XBP1 的亚细胞定位
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 第二节 XBP1 肝细胞内结合蛋白的筛选与研究
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 第三节 部分已知基因的克隆化鉴定及体外免疫共沉淀实验
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 第四节 XBP1 基因启动子活性检测及结构分析
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 总结及展望
  • 文献综述一
  • 文献综述二
  • 致谢
  • 攻读博士期间研究成果及发表的学术论文
  • 相关论文文献

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