影响乙型肝炎病毒感染结局的候选基因多态性研究

论文摘要

目的：近年来基因多态性研究特别是全基因组关联研究（GWAS）发现了许多慢性肝病如丙型肝炎、乙型肝炎、非酒精性脂肪性肝病和原发性胆汁性肝硬化等相关的单核苷酸多态性（SNP）位点。这些基因多态性的结果对于预测肝病进展的风险、揭示肝病的发病机制和决策病人的个体化治疗都有积极的意义。一项GWAS报道了一种由7个不同基因上的SNP位点组成的数学模型-肝硬化风险评分（CRS）可预测高加索人群丙型肝炎患者的肝纤维化发生风险,并提示了多个肝纤化相关的分子如Toll样受体4（TLR4）、鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子1（AZIN1）、瞬时感受器电位阳离子通道M5 （TRPM5）、突触素结合蛋白5类似物（STXBP5L）、退化精母细胞脂肪脱氢酶类似物1 （DEGS1）、衔接蛋白复合体3σ2亚单位（AP3S2）和水通道蛋白2（AQP2）。另有多项GWAS同时证明编码干扰素（IFN）-λ3的白细胞介素28B （IL28B）基因上的rs12979860和rs8099917等位点与丙型肝炎病毒（HCV）感染者干扰素治疗的反应和HCV的自发清除有密切联系。IL28B保护性基因型的携带者有更高的病毒学应答率和自发病毒清除率,并且其多态性会影响肝酶和HCV-RNA水平。这些新发现的位点在乙型肝炎病毒（HBV）感染中的作用尚不清楚,因此本研究拟验证这些SNP位点和乙型肝炎肝硬化的发生和HBV慢性感染的形成等临床表型的相关性,并进一步探讨多个SNP标志联合应用较单独应用的临床价值异同。方法：研究收集具有HBV感染表现的人群共988例,其中包括慢性HBV感染者伴肝硬化的429例、无肝硬化的慢性HBV感染者285例和274例健康恢复者。确定研究人群中肝硬化的发生、肝癌的发生、肝病进展程度和速率、肝炎发作史和HBV标志物等相关的不同临床表现型。运用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法检测9个候选基因上的14个SNP位点。分析CRS相关位点与肝硬化发生、肝癌的发生、肝病总体严重程度、肝病疾病进展速率和失代偿肝病发生的关系。分析IL28B多态性位点与HBV的自发清除、HBV相关肝炎发作、肝硬化发生、HBeAg清除和HBV-DNA水平的相关性。对有意义的多个位点合并后比较与单个位点应用时对肝硬化发生的区分意义,主要从统计值的大小、接受者工作特征曲线下面积大小进行比较。结果：研究人群呈现不同的疾病进展程度和进展速率。位于AZIN1基因的rs2679757位点与肝硬化发生有关联,GG+AG基因型比AA基因型的比值比（OR）为1.47,95%可信区间（CI）为1.08-2.01（P=0.01）。位于TRPM5基因的rs886277位点与肝硬化的发生有关联,CC基因型比CT+TT基因型的OR值为1.63,95%CI为1.20-2.22（P=0.002）。Rs2679757和rs886277与肝病疾病进展的严重程度和速率都有关系,rs2679757 GG+AG基因型和rs886277 CC基因型和较重的肝病程度、较快的疾病进展速率和高肝硬化失代偿发生率相关。Rs2679757和rs886277两者的危险基因型合并后分析得出的OR值为2.29,95% CI 1.50-3.52（P=0.000）,较单一位点的OR值增大。222例病人的分析提示高加索人群CRS在肝硬化组和无肝硬化组平均值分别为0.624和0.636,两者比较无明显区别（P>0.05）。慢性HBV感染者和健康恢复者相比,IL28B rs12979860 CC基因型显示出有利于HBV表面抗原清除的倾向（OR=0.61,95% CI 0.36-1.04, P=0.07）。IL28B rs12979860和rs8099917位点和HBVe抗原清除、HBV-DNA水平、肝炎发作和肝硬化均无明显关联（P>0.05）。TLR4 rs4986791和AZIN1 rs62522600位点在中国人群中没有多态性。其余各位点均和肝硬化的发生没有明显关联（P>0.05）。在肝癌分析中也未得出明显相关性（P>0.05）。结论：AZIN1和TRPM5基因多态性在HBV感染后肝纤维化的进展中可能发挥作用。IL28B的基因多态性在HBV感染中发挥的作用可能不如在HCV感染中重要。它们在HBV和HCV感染、在高加索人群和中国人群中对肝病发生发展可能都有影响。AZIN1、TRPM5和IL28B基因及其多态性发挥作用的具体机制值得进一步研究。HCV肝病相关的多态性位点仍需要在HBV感染中进行临床验证。多个SNP联合应用可以作为一种预测慢性肝病进展的标志物。

论文目录

• 本文涉及的缩略语列表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 基因多态性和慢性肝病相关研究的现状
• 前言
• 研究方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 丙型肝炎相关多态性在中国乙肝人群中的验证
• 前言
• 病例与方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分 多个多态性位点联合应用的临床价值
• 前言
• 病例与方法
• 结果
• 讨论
• 总结
• 1.研究结论
• 2.课题的创新点
• 3.实验中的不足和后续工作
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录
• 致谢