壳聚糖固定化蚯蚓纤溶酶研究

论文摘要

以壳聚糖为载体,分别用戊二醛交联法、环氧氯丙烷法、甲醛活化法、羰基二咪唑活化法固定蚯蚓纤溶酶,对蚯蚓纤溶酶的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究,确定了戊二醛交联法固定化酶,酶的活力回收最高。酶固定的最适条件为：1g用pH6.5的磷酸盐缓冲液浸泡的壳聚糖载体与5mL1%戊二醛在25℃交联8h,充分洗去戊二醛之后,加入蚯蚓纤溶酶13U,4℃吸附6h,充分洗去未交联的游离酶,酶活力回收达为63%,固定化酶的比活为0.082U/mg。固定化酶,游离酶的最适温度均为50℃,游离酶的最适pH值为8.5,而固定化酶的最适pH值为8.0,固定化酶的热稳定性,pH稳定性均比游离酶有所提高,游离酶、固定化酶都能水解纤维蛋白原和纤维蛋白,固定化酶不再水解BSA,游离、固定化蚯蚓纤溶酶不能水解血红蛋白、超氧化物歧化酶和凝血酶原。用戊二醛交联法固定蚯蚓纤溶酶8号单组分,确定了酶固定的最适条件为：1g用pH7.0的磷酸盐缓冲液浸泡的壳聚糖载体与5mL1%戊二醛在25℃交联4h,充分洗去戊二醛之后,加入蚯蚓纤溶酶8号1.9IU,4℃吸附6h,充分洗去未交联的游离酶,酶活力回收达45.3%,固定化酶的比活为0.0086U/mg。游离、固定化8号组分都可将纤维蛋白原水解,但都不能水解BSA。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 前言
• 1.1 血栓及抗血栓药物
• 1.1.1 血栓简介
• 1.1.2 抗血栓药物
• 1.2 蚯蚓纤溶酶
• 1.2.1 蚯蚓纤溶酶简介
• 1.2.2 理化性质
• 1.2.3 蚯蚓纤溶酶的酶学行为
• 1.2.4 药效学研究
• 1.2.5 化学修饰及固定化
• 1.2.6 蚓激酶组分的复杂性
• 1.3 壳聚糖
• 1.3.1 壳聚糖简介
• 1.3.2 固定化载体
• 1.4 酶的固定化
• 1.4.1 酶固定化简介
• 1.4.2 固定化方法
• 1.5 前期研究、本论文的主要研究内容及意义
• 第2章 壳聚糖的制备和蚯蚓纤溶酶全组分的分离
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 仪器
• 2.1.4 方法
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 酸碱滴定测定脱乙酰度
• 2.2.2 紫外光谱法测定脱乙酰度
• 2.2.3 天然PAGE检测亲和层析结果
• 2.2.4 蛋白浓度标准曲线
• 2.2.5 BAEE测酶活
• 2.3 小结
• 第3章 蚯蚓纤溶酶全组分的固定化
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 试剂
• 3.1.3 仪器
• 3.1.4 方法
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 戊二醛交联法
• 3.2.2 环氧氯丙烷
• 3.2.3 甲醛活化法
• 3.2.4 羰基二咪唑
• 3.3 小结
• 第4章 固定化蚯蚓纤溶酶全组分的性质
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 试剂
• 4.1.3 仪器
• 4.1.4 方法
• 4.2 结果与讨论
• 4.2.1 游离酶、固定化酶性质比较
• 4.2.2 蚯蚓纤溶酶水解血栓作用
• 4.2.3 纤维蛋白平板法测酶活
• 4.3 小结
• 第5章 单组分8的固定化和性质鉴定
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 试剂
• 5.1.3 仪器
• 5.1.4 方法
• 5.2 结果与讨论
• 5.2.1 PAGE电泳检测纯化的8号组分
• 5.2.2 戊二醛固定8号组分条件的优化
• 5.2.3 测定固定化酶的比活
• 5.2.4 固定化8号组分溶栓性
• 5.3 小结
• 第6章 结论
• 参考文献
• 致谢