论文摘要
体细胞核移植技术（SCNT）具有巨大的潜力和广阔的应用前景,如:培育优良畜种和生产实验动物、保护濒危动物、进行治疗性克隆和生产转基因动物等,但核移植效率的低下制约了其产业化的发展,在克隆机理尚未阐明的情况下,通过技术方法上的提高无疑为核移植本身的发展提供了契机。本课题以活体取卵（OPU）牛的卵母细胞为核受体,依次针对核移植操作过程中的去核技术、供核细胞处理技术、重构胚的活化技术及胚胎的培养技术五个关键技术环节设计了相应实验,以提高牛核移植的效率。实验结果显示:Hoechst33342染色去核法相对盲吸去核法明显提高了去核率（100%:60%）;采用pronase酶处理供核细胞后其融合率明显高于不经pronase酶处理组的融合率（78.69%:54.88%）;离子霉素活化方法与电活化方法对重构胚卵裂率无明显影响（59.35%:58.84%）,但活化后的死亡率显著的降低（5.10%:23.26%）;使用ACM与胎鼠皮肤成纤维细胞（MEF）共培养体系时的囊胚率明显高于B2与颗粒细胞（GC）共培养体系时的囊胚率（44.91%:35.24%）,而且囊胚移植后的90天受孕率也有显著的差异（35.37%:9.26%）通过上述结果证明采用Hoechst33342染色去核法+pronase供核细胞处理+离子霉素活化+ACM与MEF共培养体系更有利于提高牛体细胞核移植的效率。
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