论文摘要
HAb18G/CD147属于免疫球蛋白超家族的成员,是一种在机体中广泛表达的单次跨膜的糖蛋白,参与生命活动中的许多生理过程,如肿瘤细胞的侵袭和转移,淋巴细胞的迁移和活化,组织修复与重建,炎症,Alzheimer’s病等,并且发挥着重要的生物学功能。而许多功能的发挥都依赖于它的胞外段（HAb18GEP）及其糖基化修饰。因此,对HAb18GEP进行空间结构方面的研究,从而阐明它与其它分子的相互作用机制,对了解它是如何发挥功能是十分必要的。核磁共振技术最主要的优势在于可以在原子分辨水平上给出溶液中生物大分子的结构、构象信息,尤其能够简便快捷地研究蛋白质间相互作用,从而获得生物大分子在有机体内的实际情况。因此,我们采用NMR方法对HAb18GEP结构进行初步研究。由于HAb18GEP蛋白在原核系统中的表达主要是以包涵体形式存在的,本研究摸索了一套针对HAb18GEP的有效的体外复性方法,并成功地对其进行了复性。利用核磁共振技术对HAb18GEP及其两个结构域进行了结构方面的初步研究,完成了C80的主链指认,为下一步进行溶液结构的研究和蛋白质相互作用的研究打下了良好的基础。本研究主要分为三个部分:（一）HAb18GEP在大肠杆菌中的表达、复性及稳定性研究优化培养条件,实现了HAb18GEP的高效表达,获得大量以包涵体形式存在的蛋白,并成功对蛋白进行了体外复性。应用NMR技术证明蛋白质得到了很好的折叠。对蛋白质进行了稳定方面的研究,确认了蛋白质降解产物为9.5kDa的肽段,并且对蛋白样品的溶液条件进行了优化,改善了核磁共振实验数据的质量。（二）HAb18GEP的C-结构域和N-结构域的表达、复性根据HAb18GEP的二级结构预测及对其的稳定性研究,分别对HAb18GEP的两个结构域进行了克隆、表达。对其中的N90和C80蛋白进行了表达、体外复性、纯化,NMR实验证明得到了很好的折叠。（三）C80蛋白的主链指认对C80蛋白进行了同位素标记、表达、体外复性和纯化,NMR实验证明其具有良好的折叠。我们收集了C80全部主链三共振数据并对其进行分析,其85%主链CHN原子得到了化学位移归属。该工作为进一步的溶液结构研究奠定了基础,并为后续蛋白质相互作用研究提供依据。