依达拉奉后处理对兔心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

论文摘要

目的:凋亡与心肌缺血再灌注损伤、心肌缺血预适应和缺血后处理有着密切的联系。缺血后处理尤其是药物的缺血后处理对心肌缺血再灌注损伤的保护确切作用机制是目前研究的热门课题。本实验旨在通过依达拉奉后处理初步探讨缺血后处理和药物后处理在减轻心肌缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法:建立在体新西兰大白兔模型:新西兰大白兔禁食12小时后,用30%的乌拉坦3ml/kg的剂量从兔的耳缘静脉注射麻醉,待麻醉平稳后,仰卧位固定于手术台上。兔颈部常规消毒,行气管切开、气管插管,接DH-140型动物呼吸机控制呼吸（呼吸频率40次/min,潮气量30ml,吸入氧浓度100%）。经胸骨左缘3—4肋间开胸,小撑开器撑开,打开心包显露心脏,观察心脏跳动及其颜色,确保没有异常。在左心耳根部下方穿带有套管（减轻人为对血管壁的损伤）的线结扎冠状动脉左前降支（LAD）。心电图肢体导联末端埋植于皮下以记录心电图ST段变化。结扎成功的标志为同步心电图标准II导联ST段抬高,QRS幅度升高及结扎线以下左心室前壁出现发绀。分离右股静脉（备抽血检查用）。健康新西兰大白兔24只,体重2.5—3.0 kg,随机分为三组。对照组（IR组）:全心缺血40min,再灌注60min;缺血后处理组（HCL组）:全心缺血40 min,再灌注10s、缺血10s,反复3次后,再灌注59min;依达拉奉后处理组（YPC组）:全心缺血40min,灌注以3mg/kg的依达拉奉10min,然后再灌注50min。测定缺血前5min、再灌注30min及结束时冠脉流出液中肌酸激酶同工酶（CK-MB）活性,再灌注结束即刻取左心室组织,测定超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量、ATP含量,采用流式细胞仪和间接免疫荧光法测定细胞中Bcl-2/Bax蛋白量,计算心肌细胞凋亡率,电镜观察心肌超微结构,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:1.CK-MB活性的变化:在缺血前5minCK-MB活性,IR组（35.12±5.23）,HCL组（35.20±5.28） ,YPC组（35.24±5.43） ;再灌注30min,IR组（122.32±10.14）,HCL组（65.34±6.28）, YPC组（67.26±7.34） ;再灌注结束时IR组（135.25±9.26） , HCL组（69.67±6.78）, YPC组（72.85±6.24）。与缺血前5min比较,3组再灌注30min及结束时CK-MB活性升高（P<0.05）;缺血前5min各组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;与IR组比较,YPC组和HCL组再灌注30 min及结束时CK-MB活性降低（P<0.05）;YPC组和HCL组比较差异无统计学意义（P>0.05）。2.心肌组织SOD活性、MDA及ATP含量变化:再灌注结束时MDA含量,IR组（65.32±12.28）, HCL组（52.11±11.23）, YPC组（54.32±10.33） ; SOD活性, IR组（57.24±10.38）,HCL组（71.35±11.87）, YPC组（69.53±10.67）;ATP含量,IR组（3.00±0.42）, HCL组（4.21±0.53）,YPC组（4.37±0.64）。与IR组比较,再灌注结束时HCL组和YPC组的SOD活性、ATP含量升高,MDA含量降低（P<0.05）。HCL组和YPC组上述指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。3.心肌组织中Bcl-2、Bax的含量和心肌细胞凋亡率变化:再灌注结束时Bcl-2的含量,IR组（FI=0.70±0.06）,HCL组（FI=0.98±0.04）,YPC组（FI=0.97±0.07）;Bax的含量,IR组（FI=1.65±0.15）,HCL组（FI=1.27±0.14）,YPC组（FI=1.21±0.14）;心肌细胞凋亡率,IR组（19.75±1.81）%,HCL组（10.46±0.91）%,YPC组（9.68±0.59）%。IR组与IR组比较,再灌注结束时HCL组和YPC组的Bcl-2的含量升高,Bax的含量降低（P<0.05）,心肌细胞凋亡率明显下降（P<0.05）。HCL组和YPC组上述指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。4.心肌的超微结构:IR组心肌细胞肌丝大片溶解,z线断裂,线粒体内室肿胀,部分线粒体发生嵴溶或崩解。HCL组心肌细胞肌丝排列整齐,z线清晰,线粒体轻度肿胀,核染色质分布较均匀。YPC组心肌细胞肌丝排列整齐,z线清晰,线粒体轻度肿胀,嵴排列较紊乱,核染色质分布较均匀。5.心肌细胞凋亡:IR组TUNEL染色阳性细胞明显多于HCL组和YPC组,而HCL组和YPC组没有显著差别。结论:1依达拉奉后处理和缺血后处理可能都是通过减少氧化剂介导的细胞损伤和细胞能量消耗来减少细胞凋亡,从而减轻心肌缺血再灌注损伤。2依达拉奉后处理和缺血后处理可能通过上调Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,从而减少心肌细胞凋亡,达到心肌保护的作用。

论文目录

• 中文提要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 缺血后处理对心肌保护的研究进展
• 攻读学位期间公开发表的论文
• 中英文缩写词表
• 致谢