人参皂甙Rg1对TGF-β1刺激的肾小管上皮细胞转分化及增殖的作用

论文摘要

目的：肾间质纤维化是各种肾脏疾病进展至终末期肾病的共同通路。肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（TEMT），肾小管上皮细胞的凋亡增加和增殖能力的下降在肾间质纤维化的进展中起着重要的作用。a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）是肌成纤维细胞的标志性蛋白。业已证实转化生长因子-β1（TGF-β1）可以诱导肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化，其发挥作用的下游因子为结缔组织生长因子（CTGF）；TGF-β1还可引起肾小管上皮细胞凋亡增加和增殖能力的下降，导致肾小管萎缩。已有碍究表明三七总皂甙（PNS）可以延缓肾间质纤维化的进展，改善肾脏结构和功能。人参皂甙Rg1（G-Rg1）是PNS的主要成分之一。本实验研究G-Rg1对TGF-β1刺激的大鼠肾小管上皮细胞EMT及增殖的影响，CTGF的表达，细胞外基质成分胶原Ⅰ（Col-Ⅰ），胶原Ⅲ（Col-Ⅲ）和纤维粘连蛋白（FN）的影响；探索G-Rg1在延缓肾间质纤维化中的作用及机制。方法：将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）分为空白对照组，TGF-β1刺激组及不同时间和不同剂量的G-Rg1干预组。细胞增殖实验每组设8复孔，培养1、3、5天，其余实验每组设3复孔，培养5天。倒置相差显微镜观察细胞形态。免疫组织化学染色半定量检测a-SMA，CTGF的表达。a-SMA，CTGF的mRNA的检测采用RT-PCR的方法。ELISA法测定细胞培养上清液中Col-Ⅰ，Col-Ⅲ和FN的含量。MTT法检测细胞增殖。结果：（1）与对照组相比，培养5天后，TGF-β1刺激组细胞形态学发生改变，从原有典型的铺路石样上皮细胞形态转变为长梭形类似成纤维细胞的形态；免疫组织化学见大量a-SMA和CTGF阳性的细胞；RT-PCR结果示a-SMA、CTGF的mRNA表达明显增高（P＜0．05）；细胞培养上清液Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN的含量显著增加（P＜0．05）；MTT示细胞增殖明显抑制（P＜0．05）。（2）与TGF-β1刺激组相比，各G-Rg1干预组均不同程度的抑制了TGF-β1刺激的细胞形态学改变；免疫组化观察发现a-SMA、CTGF的表达下调（P＜0．05）；RT-PCR结果示a-SMA、CTGF的mRNA的表达下调（P＜0．05）；细胞培养上清液Col-Ⅰ，Col-Ⅲ和FN的含量减少（P＜0．05）；MTT示细胞增殖增强（P＜0．05）。（3）相关分析显示，CTGF、a-SMA的mRNA表达呈正相关（r=0．910，P＜0．05）；Col-Ⅲ的分泌与a-SMA、CTGF的mRNA的表达均呈正相关，r分别为0．818、0．863，P＜0．05；细胞增殖A值与a-SMA、CTGF的mRNA表达均呈负相关，r分别为-0．899、-0．907，P＜0．05。细胞增殖A值与Col-Ⅰ，FN的分泌均呈负相关，r分别为-0．967、-0．987，P＜0．05。结论：1．TGF-β1可以诱导大鼠肾小管上皮细胞肌成纤维细胞转分化，抑制其增殖，刺激细胞外基质的分泌，促进CTGF表达。2．G-Rg1可以抑制TGF-β1刺激的NRK52E细胞的EMT，促进增殖，减少CTGF的表达和ECM的分泌。3．G-Rg1对TGF-β1刺激的TEMT的抑制作用可能与抑制TGF-β1的下游因子CTGF的表达有关。4．G-Rg1促进TGF-β1刺激的NRK52E细胞的增殖的作用可能与抑制TEMT，抑制CTGF的表达，减少ECM的分泌有关。

论文目录

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