重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒的研究

论文摘要

本论文以天然植物类抗肿瘤药物重酒石酸长春瑞滨为模型药物,采用改良的冷熔法制备载药的重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒。从筛选脂质材料和制备工艺入手,解决水溶性药物在固体脂质纳米粒中的包封率低的难题。在确定了合适的脂质材料和制备工艺后,采用冷溶法成功地制备了载药的重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒,并且考察了他们的理化性质,如:粒径、电位、包封率和载药量、体外释放特性、肿瘤细胞的摄取情况等。并且进一步考察了抗肿瘤药效学。针对固体脂质纳米粒在体内消除快的缺点我们进一步采用PEG修饰的方式来制备了具有长循环特性的固体脂质纳米粒,同时也对PEG化的重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒的理化性质和抗肿瘤药效学进行了考察。通过处方前的研究工作,选择冷熔法作为制备方法;单硬脂酸甘油酯（GMS）为制备载药固体脂质纳米粒的主要脂质材料;冻干保护剂为15%蔗糖和1%胆酸钠。采用动电光散射技术测量不同处方的重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒的粒径和电位,结果显示重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒的粒径范围大约为在150-350nm范围,电位约+20 mV。原子力显微镜观察纳米粒的表面形态结果显示,用冷熔法制备的重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒形状不规则,但表面光滑。用超滤法测量药物的包封率,结果显示最高可达77.2%。体外释放试验表明,重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒在至少48小时内可以持续释放,累计释放量可达50%-70%。用PEG2000-SA对重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒进行修饰,以制备具有长循环特性的PEG化重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒,并对修饰后的纳米粒的特性进行了考察。试验结果表明,经PEG修饰后粒径有下降的趋势但是变化并不十分的明显;电位有一定程度的下降,大约为+10 mV左右;包封率有轻微的下降,但是仍有60%以上;体外释放加快,仍可持续释放48小时。本论文通过荧光倒置显微镜观察载体的细胞摄取情况以及细胞摄取的定量考察试验发现,小鼠单核细胞-巨噬细胞株RAW264.7对PEG修饰的固体脂质纳米粒的吞噬能力明显下降,而PEG修饰的固体脂质纳米粒在肿瘤细胞MCF-7和A549细胞中的摄取却明显高于普通的固体脂质纳米粒。两种载药固体脂质纳米粒的体外抗肿瘤药效学考察结果显示,重酒石酸长春瑞滨在载到固体脂质纳米粒中以后,细胞毒性明显提高。在A549细胞系,重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒和10%PEG修饰的重酒石酸长春瑞滨固体质脂纳米粒的IC50值比游离药物分别降低了3.1和14.3倍,而这一数值在MCF-7细胞系中更高,可达6.5和23.7倍。本论文研究了一种有效的制备亲水性药物固体质脂纳米粒的方法,工艺适合工业化大生产,有很强的工业化前景。本论文的研究制备的重酒石酸长春瑞滨固体质脂纳米粒有较高的药物包封率和较好的物理稳定性。充实了对重酒石酸长春瑞滨这一抗肿瘤药物的研究内容,为临床更好的应用该药提供了更多的启示和线索。首次尝试了固体脂质纳米粒经PEG修饰后可以降低巨噬细胞的吞噬能力,同时可以增强肿瘤细胞的摄取能力,丰富了药物传递系统的研究领域。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 1.本论文的立题依据
• 2.固体脂质纳米粒的研究现状
• 3.固体脂质纳米粒存在的问题与发展趋势
• 4.制剂技术
• 5.重酒石酸长春瑞滨的药理作用以及现存的制剂
• 6.研究思路
• 第一章 重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒的处方前研究
• 1.1 材料与仪器
• 1.2 重酒石酸长春瑞滨的含量测定方法
• 1.3 制备工艺的选择
• 1.3.1 冷溶法制备固体脂质纳米粒
• 1.3.2 粒径测量
• 1.4 脂质材料的选择
• 1.4.1 脂质材料对固体脂质纳米粒的粒径的影响
• 1.4.2 重酒石酸长春瑞滨在不同脂质中的分配系数
• 1.4.3 脂质材料对固体脂质纳米粒的细胞摄取的影响
• 1.5 储存方法的选择
• 1.5.1 固体脂质纳米粒混悬液的贮存条件的选择
• 1.5.2 固体脂质纳米粒冻干保护剂的选择
• 1.6 结果与讨论
• 1.6.1 重酒石酸长春瑞滨的含量测定方法
• 1.6.2 制备工艺的选择
• 1.6.3 脂质材料的选择
• 1.6.4 储存方法的选择
• 本章小结
• 第二章 重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒的制备和理化性质研究
• 2.1 重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒的制备
• 2.1.1 材料与仪器
• 2.1.2 实验方法
• 2.1.2.1 制备方法
• 2.1.2.2 粒径和电位的测量
• 2.1.2.3 原子力显微镜观察纳米粒形态
• 2.1.2.4 重酒石酸长春瑞滨含量测定方法
• 2.1.2.5 包封率的测定
• 2.1.2.6 体外释放的考察
• 2.1.3 结果与讨论
• 2.1.3.1 重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒的制备
• 2.1.3.2 重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒的基本特性
• 2.1.3.3 重酒石酸长春瑞滨含量测定方法
• 2.1.3.4 药物的包封率
• 2.1.3.5 体外释放行为
• 2.2 PEG修饰的重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒的制备
• 2.2.1 材料与仪器
• 2.2.2 实验方法
• 2.2.2.1 制备方法
• 2.2.2.2 粒径和电位的测量
• 2.2.2.3 包封率的测定
• 2.2.2.4 体外释放的考察
• 2.2.3 结果与讨论
• 2.2.3.1 PEG修饰的重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒的制备
• 2.2.3.2 粒径和电位的测量
• 2.2.3.3 包封率和体外释放行为的考察
• 2.3 重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒冻干后样品的性质考察
• 2.3.1 材料与仪器
• 2.3.2 实验方法
• 2.3.2.1 重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒冻干样品的制备
• 2.3.2.2 冻干后样品的粒径测量
• 2.3.2.3 冻干后样品的包封率和体外释放行为研究
• 2.3.3 结果与讨论
• 2.3.3.1 重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒冻干制剂的制备
• 2.3.3.2 重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒冻干制剂的性质考察
• 本章小结
• 第三章 重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒的体外抗癌活性评价
• 3.1 材料与仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 硬脂胺-异硫氰基荧光素嫁接物的合成
• 3.2.2 荧光标记固体脂质纳米粒的制备
• 3.2.3 荧光标记固体脂质纳米粒的粒径和电位测定
• 3.2.4 荧光标记固体脂质纳米粒的荧光素包封率的测量
• 3.2.5 细胞培养
• 3.2.6 荧光倒置显微镜观察荧光标记固体脂质纳米粒的细胞摄取
• 3.2.7 荧光标记固体脂质纳米粒的细胞摄取率测定
• 3.2.8 固体脂质纳米粒的安全性考察
• 3.2.9 重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒的体外药效学考察
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 硬脂胺-异硫氰基荧光素嫁接物的合成
• 3.3.2 荧光素标记固体脂质纳米粒的制备及其性质考察
• 3.3.3 荧光标记固体脂质纳米粒的细胞摄取
• 3.3.4 固体脂质纳米粒的安全性
• 3.3.5 重酒石酸长春瑞滨固体脂质纳米粒的体外药效学
• 本章小结
• 全文结论
• 参考文献
• 致谢
• 硕士期间发表的文章及专利申请