论文摘要
血吸虫病（schistosomiasis）是一种危害严重、分布广泛的人畜共患病。半个多世纪以来,我国血吸虫病防治取得了举世瞩目的成就,但由于重复感染严重,单靠治疗药物不能控制血吸虫病的流行,加强血吸虫病疫苗候选分子的筛选和疫苗的研制开发无疑是血吸虫病防治的重大需求。日本血吸虫具有复杂的生活史,虫体大,抗原复杂,分离、鉴定与血吸虫性别分化、发育相关的分子,对探讨血吸虫的发育及成熟机制,筛选新的抗血吸虫疫苗候选分子都具有重要意义。作者在本实验室血吸虫蛋白组学研究的基础上,从小鼠、大鼠、东方田鼠来源的10d童虫差异表达基因信息中,筛选择了SjTOM34基因开展以下研究：1日本血吸虫基因SjTOM34的克隆及在不同发育阶段和不同宿主来源虫体表达分析本研究首次克隆了日本血吸虫基因SjTOM34全长cDNA序列,GenBank登录号为226473300,生物信息学分析表明SjTOM34基因的ORF为1083bp,编码360个氨基酸,理论分子量为40843.38Daltons,理论等电点为4.94。以看家基因Tublin为内参,应用荧光定量PCR技术分析了SjTOM34基因在日本血吸虫7d、14d、21d、28d、35d和42d雌雄虫体内的表达情况,结果显示,SJTOM34在日本血吸虫童虫和成虫均有表达,其中在35d虫体内表达量最高,在雌雄虫体内表达量没有明显差异,在小鼠来源的虫体内表达量最高,大鼠次之,东方田鼠来源的虫体内表达量最低。2重组表达质粒pET28a（+）-SjTOM34的构建、表达及免疫保护效果评估成功构建了pET28a （+）-SjTOM34重组原核表达质粒,重组蛋白在E.coli （DE3）中呈可溶性表达,分子量分别为44kD, Western blotting分析表明融合蛋白具有较好的抗原性。用纯化的SjTOM34/HIS重组蛋白免疫BALB/c小鼠,结果与空白对照组相比,重组蛋白SjTOM34/HIS在小鼠中诱导了15.9%的减虫率和30.41%的肝脏减卵率,差异显著（p<0.05）。应用ELISA方法检测小鼠血清中特异性IgG及亚型IgG1、IgG2a抗体水平变化,结果SjTOM34重组蛋白免疫组小鼠在3次免疫后均诱导产生了高水平的特异性IgG. IgG1、IgG2a抗体,推测重组蛋白SjTOM34在小鼠中诱导产生免疫保护作用可能与免疫小鼠血清中高滴度的特异性IgG抗体有关。3pVAX1-SjTOM34的构建和DNA疫苗的免疫保护效果评估成功构建了重组真核表达质粒pVAX1-SjTOM34,重组pVAX1-SjTOM34在BALB/c小鼠中诱导了35.4%的减虫率和30.22%的肝脏减卵率,差异显著（p<0.05）,重组pVAX1-SjTOM34免疫小鼠在3次免疫后诱导产生了高滴度的特异性IgG抗体。应用流式细胞术（FCM）检测了免疫和非免疫小鼠体内CD4+和CD8+细胞及IL4、FN-γ的变化。应用ELISA方法检测小鼠血清中特异性IgG及亚型IgG1、IgG2a抗体水平变化。初步实验结果显示,与空白对照组相比,免疫组小鼠CD4+、CD8+细胞的数值以及CD4+/CD8+比值,细胞因子IL4、IFNy水平都有不同程度的变化,免疫组小鼠机体诱导产生了Th1/Th2混合型的免疫反应。本文研究结果为深入探讨SjTOM34的生物学功能,筛选新的血吸虫病疫苗候选分子和药物靶标提供了基础。
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相关论文文献
- [1].日本血吸虫TOM34基因的克隆和表达分析[J]. 中国人兽共患病学报 2013(02)