侧柏叶化学成分提取及活性功能研究

论文摘要

侧柏叶（Cacumen Platycladi）是侧柏（Platycladus orentalis （L.） Franco）的干燥嫩枝梢及叶,主要含有黄酮、挥发油、鞣质等活性成分,其化学成分和生物活性已有初步研究报道。本文对侧柏叶总黄酮进行了提取、纯化,所得结果与已有文献报道大致相同；通过与常用的防腐剂山梨酸钾（Potassium sorbate）对比研究了侧柏叶挥发油抑制真菌效果；初步研究了侧柏叶对小鼠正常毛发生长的促进作用和预防环磷酰胺（Cyclophosphamide, CYP）所引起的化疗脱毛作用的活性实验；此外又研究了侧柏叶对酪氨酸酶（Tyrosinase, TYR）的抑制作用。首先,采用正交实验考察了提取过程中各因素对侧柏叶总黄酮含量的影响。确定了提取最佳工艺条件为：65%乙醇提取2次、提取时间1.5 h、每次料液比1：15,总黄酮含量为1.70%。研究大孔树脂纯化侧柏叶总黄酮的工艺条件,对大孔树脂的种类及其静态吸附、静态解吸能力进行初步探讨。通过静态吸附和解吸附的比较,从6种不同型号的大孔树脂中筛选出AB-8大孔树脂进行静态吸附和解吸实验。确定AB-8的最佳静态吸附条件为：样品溶液中总黄酮含量在1.4 mg/mL左右,样品溶液pH 4.5的条件下25℃恒温振荡8 h；最佳静态解吸条件为：用80%乙醇洗脱,解吸液用量为10 mL/g。其次,采用水蒸气蒸馏法提取侧柏叶挥发油,通过多次提取发现,采用料液比1：12、提取5 h,其得率约为0.6%,之后油量不再增加。通过GC-MS分析了侧柏叶挥发油中的化学成分,用归一化法测定其相对百分含量,共分离出53个峰,鉴定了含量较高的5个化学成分。通过体外抑制真菌试验比较了挥发油和常用食品防腐剂山梨酸钾对3种常见真菌的抑菌活性,同时考察了两者对这3种真菌的最低抑菌浓度（MIC）。结果显示,侧柏叶挥发油对上述3种常见真菌表现出明显的抑制活性,侧柏叶挥发油的抑菌作用强于山梨酸钾。侧柏叶挥发油对黑曲霉和青霉的最低抑菌浓度均为25 mg/mL;对根霉的最低抑制浓度为12.5 mg/mL。山梨酸钾对黑曲霉和青霉的最低抑菌浓度均大于50mg/mL;对根霉的最低抑制浓度为40 mg/mL。最后,采用松香石蜡脱毛法诱导小鼠体毛由休止期进入生长期。通过研究对正常毛发生长的促进作用结果可以看出,侧柏叶挥发油（0.005 g/mL）对促进毛发生长作用较明显,醇提物（0.01 g/mL）次之。而通过对预防环磷酰胺所引起的化疗脱毛作用结果可以看出,侧柏叶醇提物（0.01 g/mL）和挥发油（0.005 g/mL）可以适当延缓脱毛,对环磷酰胺引起的毛囊损伤具有一定的保护作用,并且两者与空白对照组比较均有统计学差异。在本实验中,注射环磷酸胺后约7天小鼠开始出现明显的脱毛。另外,以L-酪氨酸为底物,从马铃薯中提取粗酪氨酸酶液,以Vc乙基醚为阳性对照,采用比色法研究了侧柏叶抑制酪氨酸酶的能力。结果得出乙酸乙酯萃取物、AB-8纯化物和Vc乙基醚的半数抑制率（IC5o值）依次分别为0.529、0.314、0.496mg/mL；醇提物的IC5o值大于0.8 mg/mL。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第1章 文献综述
• 1.1 概述
• 1.2 侧柏叶研究进展
• 1.2.1 侧柏叶化学成分研究及进展
• 1.2.2 药理作用研究进展
• 1.2.3 侧柏叶经济应用价值研究
• 1.3 研究目的及意义
• 1.3.1 侧柏叶抑真菌作用研究
• 1.3.2 侧柏叶对毛发生长的影响研究
• 1.3.3 侧柏叶抑制酪氨酸酶活性研究
• 第2章 侧柏叶总黄酮的提取及初步纯化研究
• 2.1 侧柏叶总黄酮的提取工艺研究
• 2.1.1 主要材料与仪器
• 2.1.2 方法
• 2.1.3 结果与分析
• 2.1.4 结论
• 2.2 大孔树脂对侧柏叶总黄酮静态吸附及解吸研究
• 2.2.1 主要材料与仪器
• 2.2.2 方法
• 2.2.3 结果与分析
• 2.2.4 结论
• 第3章 侧柏叶挥发油提取、分析及抑制真菌实验研究
• 3.1 侧柏叶挥发油提取及GC-MS分析
• 3.1.1 主要材料与仪器
• 3.1.2 方法
• 3.1.3 结果与分析
• 3.1.4 结论
• 3.2 侧柏叶挥发油抑制真菌实验研究
• 3.2.1 主要材料与仪器
• 3.2.2 方法
• 3.2.3 结果与分析
• 3.2.4 结论
• 第4章 侧柏叶对毛发生长及对酪氨酸酶抑制作用研究
• 4.1 侧柏叶对毛发生长的影响研究
• 4.1.1 主要材料与仪器
• 4.1.2 方法
• 4.1.3 结果及分析
• 4.1.4 结论
• 4.2 侧柏叶对酪氨酸酶活性影响的实验研究
• 4.2.1 主要材料与仪器
• 4.2.2 方法
• 4.2.3 结果与讨论
• 4.2.4 结论
• 第5章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 参考文献
• 附录
• 研究生期间发表论文及奖励
• 致谢