论文摘要
目的：许多研究表明单站淋巴结转移的N2期非小细胞肺癌患者预后明显优于多站转移的患者,但其分子机制我们尚不清楚,我们通过检测N2期非小细胞肺癌单站与多站淋巴结转移的相关基因的表达谱,探讨单站纵隔淋巴结转移进一步进展的分子机制,并对差异基因进行初步验证,进一步探讨多站N2肺癌患者预后较差的分子机制,并利用差异表达基因对N2期非小细胞肺癌进行分子分期,进一步指导N2期肺癌的个体化治疗。方法：应用Agilent公司的人类基因组基因芯片分别检测临床信息一致的ⅢA期单站与多站肿瘤组织的基因表达情况,利用生物信息学软件进行比较分析,对差异表达的基因依照功能及所在信号通路进行分类,对其中与肿瘤及淋巴侵袭与转移的相关基因进行分析,并利用RT-PCR方法观察差异基因在单站与多站N2肺癌组织中的表达情况,利用免疫组化及western blot方法对差异基因从蛋白水平进行验证,另收集天津医科大学附属肿瘤医院自2002年至2006年间,随访资料完整的96例N2期肺癌患者的病例及石蜡标本,采用EnVision免疫组织化学二步法检测MUC4、IGF2在N2期肺癌组织中的表达情况；并分析MUC4的表达与临床病理参数、淋巴结转移情况、患者预后及与IGF2蛋白表达的相关性,采用SPSS 13.0统计学软件进行统计学分析。结果：1、与单站肺癌相比,多站肿瘤组织中有329个基因的差异表达水平达10倍以上。在这些基因中,与肿瘤转移相关的基因表达有88个,表达上调的基因有51个,表达下调的有37个。2、利用RT-PCR验证部分差异基因,多站肺癌组织中MUC4, ADAM28 mRNA表达水平较单站肺癌明显下调,而KRTDAP, IGF2, CLDN1则显著上调。3、采用Western blot方法检测MUC4蛋白在单站癌组织和多站癌组织中的相对表达量分别为1.037±0.054,0.317±0.047,差异有统计学差异（P<0.05）。4、采用免疫组化检测MUC4在单站N2期肺癌中表达阳性率为73%,明显高于多站肺癌（χ2=16.466,P=0.000）,而IGF2在单站N2肺癌中的阳性表达率为46%,低于多站N2肺癌（χ2=2.089,P=0.048）。5、MUC4的表达及同临床病理参数,纵隔淋巴结转移情况及临床预后的关系（1）MUC4着色部位主要位于细胞膜和（或）胞浆,胞核内无表达。MUC4在正常肺组织中的阳性率为25.4%,在N2期肺癌组织中的阳性率为47.9%,差异具有显著的统计学差异（P<0.05）。（2）在不同的临床病理参数之间,MUC4在不同性别、年龄、吸烟状况,肿瘤位置,大体部位,术后病理,肿瘤大小及T分期的N2期肺癌组织中,表达差异无统计学意义；（3）在纵隔淋巴结转移方面,MUC4在不同的淋巴结转移站数,淋巴结转移个数,隆突下淋巴结转移,区域淋巴结转移及临床（病理）N2的癌组织中,出现表达差异（P<0.05）；（4）在全组N2肺癌患者中,MUC4高表达患者共46例,其中位生存期达到43个月,5年生存率为32.6%,明显优于低表达患者（P=0.000）,在DFS（无疾病生存期）方面,MUC4高表达组的中位DFS为35个月,5年无疾病生存率达到25.3%,远远优于低表达组（P=0.000）。而IGF2高表达组共53例,其中位生存期为19个月,5年生存率仅为15.1%,明显低于低表达组（P=0.000）,在DFS方面,也得到同样的结论。（5）在COX多因素分析中,MUC4及IGF2的表达情况均是影响N2期非小细胞肺癌患者预后的独立因素（P=0.000）。（6） Spearman等级相关分析表明：在N2肺癌组织中,MUC4与IGF2的表达呈负相关（r=-0.226,P=0.027）。6、联合MUC4及IGF2对N2期非小细胞肺癌进行分子分期,其中MUC4++IGF2-组的预后最好,其中位生存期达到61个月,中位DFS为55个月,5年生存率为49.7%,5年无疾病生存率达到44.3%,均优于其他三组（P=0.000）。结论：1、单站N2进展至多站N2是多基因参与,涉及多条信号通路的,多步骤的过程,MUC4,IGF2,ADAM28,CLDN1,S100家族及MMP家族可能在单站N2进展过程中起到关键作用,为进一步理解N2期肺癌患者纵隔淋巴结转移进展的原因及分子机制,并考虑进行针对这些基因进行分子治疗。2、联合MUC4及IGF2可将N2期非小细胞肺癌分为不同的亚组,其中MUC4++IGF2-组的预后最好,可行积极的手术治疗,而对于预后较差的亚组,则不主张行手术切除,而行以化放疗为主的综合治疗模式。