论文摘要
目的研究DDP、MMC、ADM、VCR 等不同化疗药物对人肝癌细胞株BEL-7404、BEL-7404/ADM 的hTERT、端粒长度及端粒酶的影响及作用机制。方法采用RT-PCR 法检测不同化疗药及浓度对人肝癌BEL-7404、BEL-7404/ADM 细胞hTERT 影响;采用Southen Blotting 及凝胶电泳法测定不同化疗药对人肝癌BEL-7404 、BEL-7404/ADM 细胞端粒长度的影响; 采用PCR-TRAP-ELISA 法检测不同化疗药对人肝癌BEL-7404、BEL-7404/ADM 细胞端粒酶活性的影响。结果（1）经RT-PCR 扩增后,凝胶成像可见BEL-7404 细胞端粒酶亚单位hTEERT的表达随化疗药物浓度的增加而减弱。高浓度DDP处理48h后,hTERT蛋白表达受到显著抑制,低浓度DDP 处理,48h 开始抑制,72h 完全抑制。ADM高浓度处理后,hTERT 蛋白表达也受到显著抑制,低浓度72h 开始抑制。（2）高浓度（C 组）四种药物作用于BEL-7404/ADM 细胞48h 端粒酶活性均部分抑制。DDP、MMC 作用24h后抑制端粒酶活性明显,与对照组比较有显著差异（P<0.01）,作用48h、72h 后各组间比较有显著统计学意义（P<0.01）,而且随着作用时间的延长,其抑制性进一步加强,表现为明显的时间及浓度的依赖性,而ADM、VCR 部分抑制端粒酶活性。低浓度的DDP、MMC （A、B 组）在72h 完全抑制端粒酶活性表现为组间比较有明显差异性（P<0.01）而ADM、VCR72h 后表现出抑制端粒酶活性。不同化疗药物均可下调BEL-7404 细胞端粒酶活性,且其抑制作用呈时间及剂量的依赖关系。（3）亲本肝癌细胞中的平均端粒长度较肝癌耐药细胞端粒长度长,端粒长度随化疗药物浓度的增加而逐渐缩短。在两种细胞中,高浓度组（C 组）DDP、MMC、ADM、VCR 中的平均端粒长度皆与对照组相比差异显著（P<0.05）。低浓度组（A、B 组）中DDP、MMC、ADM 对BEL-7404 细胞端粒长度表现出明显的缩短,组间比较表现为显著差异性（P<0.01）,对BEL-7404/ADM 细胞端粒长度亦有一定的缩短。而VCR 对两种细胞的端粒长度均不受影响。经化疗药物处理的肝癌细胞及肝癌耐药细胞端粒的平均长度
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