一株苦豆子内生细菌的鉴定及活性代谢产物的研究

论文摘要

本研究从新疆植物苦豆子（Sophora alopecuroides）中分离到一株对棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporum f. vasinfectum）和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant staphylococcus aureus, MRSA）具有较强拮抗作用的内生细菌。根据菌株KDNB6生理生化特征和16S rDNA序列对内生细菌进行鉴定,经形态和生理生化特性及16S rDNA序列分析,结果表明菌株KDNB6各项特征与粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）最为接近。菌株KDNB6鉴定为S. marcescens。对菌株KDNB6发酵初始条件、液体培养基配方和发酵条件进行研究,最终确定最佳初始条件为选用24 h-27 h的发酵液作为种子液,接种量在4%以上,发酵72 h抑菌活性达到最高;最佳培养基配方为:葡萄糖10 g/L,硫酸铵5 g/L,麸皮20 g/L,C6H5Na3O7·2H2O 2.0 g/L,K2HPO4·3H2O 0.2 g/L,FeSO4·7H2O 0.05 g/L,MgSO4·7H2O 1.0 g/L,最佳发酵条件为pH 7.0,T 28°C,摇床转速200 r/m.通过（硅胶柱、凝胶柱）层析法对菌株KDNB6发酵液中的活性物质进行分离和纯化,分离到一个抗MRSA的活性成份。该菌产生的活性成分具有抗MRSA活性。分离得到两个抗棉花枯萎病菌成份。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 植物内生细菌的定义与研究现状
• 1.1.1 定义
• 1.1.2 植物内生细菌的研究现状
• 1.1.3 植物内生细菌的生物学作用
• 1.2 植物内生细菌对棉花枯萎病原菌的防治
• 1.2.1 植物内生细菌对棉花枯萎病原菌的抑菌机理
• 1.2.2 棉花枯萎病研究现状
• 1.3 植物内生细菌的研究方法
• 1.3.1 材料的选择和预处理
• 1.3.2 植物内生细菌的分离
• 1.4 发酵条件优化
• 1.5 发酵产物的分离纯化方法
• 1.5.1 层析法
• 1.5.2 离子交换法
• 1.5.3 大孔树脂分离法
• 1.6 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌研究进展
• 1.7 立论依据和研究内容
• 1.7.1 立论依据
• 1.7.2 研究内容及技术路线
• 第二章 苦豆子内生细菌的分离、拮抗内生细菌的筛选及鉴定
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 培养基
• 2.1.2 主要仪器与试剂
• 2.1.3 内生细菌的分离试验
• 2.1.4 拮抗细菌的初筛试验
• 2.1.5 拮抗细菌的复筛试验
• 2.1.6 菌株鉴定试验
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 苦豆子内生细菌的分离
• 2.2.2 拮抗内生细菌初筛
• 2.2.3 拮抗内生细菌复筛
• 2.2.4 菌种鉴定
• 2.3 讨论
• 第三章 发酵条件的优化控制
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 菌种
• 3.1.2 培养基
• 3.1.3 主要仪器
• 3.1.4 培养方法
• 3.1.5 接种量和最佳发酵时间的优化试验
• 3.1.6 发酵培养基的优化试验
• 3.1.7 最佳培养条件的筛选试验
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 接种量与最佳发酵时间的优化
• 3.2.2 发酵培养基的优化
• 4.2.3 最佳培养条件的优化
• 3.3 讨论
• 第四章 拮抗性内生细菌代谢产物抑菌活性物质的分离纯化
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 菌种
• 4.1.2 培养基
• 4.1.3 主要仪器与试剂
• 4.1.4 抗MRSA 活性物质与抗棉花枯萎病菌物质的提取分离试验
• 4.1.5 活性物质抗MRSA 试验与抗棉花枯萎病菌试验
• 4.1.6 活性物质的硅胶板薄层层析试验
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 活性物质分离纯化
• 4.2.2 活性物质抑菌效果
• 4.2.3 活性物质的薄层层析
• 4.3 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录 攻读硕士学位期间发表的论文目录