降脂益肝冲剂对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织硫氧还蛋白结合蛋白mRNA表达的影响

论文摘要

目的:非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是一类肝组织学改变与酒精性肝病相类似,但无过量饮酒史的临床病理综合征。近年来,非酒精性脂肪性肝病的发病率逐渐上升,已成为全球普遍关注的医学和社会问题。对其发病机制的研究很多,但没有突破性进展,氧化应激和脂质过氧化是研究的热点。硫氧还蛋白是一种氧化应激诱导的蛋白,在调节细胞内氧化还原平衡中发挥重要作用。硫氧还蛋白结合蛋白是硫氧还蛋白的抑制性转录因子和负性调节蛋白,通过抑制硫氧还蛋白的活性来发挥作用。目前临床对NAFLD防治效果尚不理想。本文根据中医理论组成降脂益肝冲剂,探讨大鼠肝组织硫氧还蛋白结合蛋白（TBP-2）mRNA的表达在NAFLD发病机制中的作用,并研究降脂益肝冲剂防治NAFLD发病和进展的疗效及作用机制。方法:1.动物模型的建立及标本的采集:72只雄性Wistar大鼠按体重层次随机分为空白对照组（BC组）:给予普通饲料;实验对照组（EC组）,实验干预组（EI组）:给予高脂饲料,每组24只,分别设9、13、17周三个时相点,每个时相点8只大鼠,相对应的组别为BC1、BC2、BC3、EC1、EC2、EC3、EI1、EI2、EI3组。EI1、EI2、EI3组分别于实验第0周、第9周和第13周开始给予降脂益肝冲剂灌胃,分别持续9W,4W,4W。同时EC组和BC组分别给予等量的生活饮用水灌胃。实验结束后分阶段处死各组大鼠,按常规制备血清、肝匀浆以及肝组织切片,并留取少量肝组织低温保存。2.检测指标:测体重、体长、肝脾湿重,并计算肝指数（肝湿重/体重×100%）、Lee’s指数（体重1/3/体长×1000）及肝脾比值（肝湿重/脾湿重）等体质指标;全自动生化分析仪测定血清转氨酶、血脂及肝组织脂质含量,葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖（FBG）,铜染色法测定血清和肝组织游离脂肪酸（FFA）水平,放免法测定血清空腹胰岛素（FINS）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,计算胰岛素敏感指数（ISI=ln〔1/（FINS×FBG）〕）;比色法测定血清和肝组织还原性谷胱甘肽（GSH）含量,黄嘌呤氧化酶法测定血清和肝组织超氧化物歧化酶（SOD）活性;硫代巴比妥酸法测定血清和肝组织丙二醛（MDA）含量;光镜下评估肝组织脂肪变性和炎症活动情况;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定TBP-2 mRNA的表达。结果:9周末实验对照组大鼠出现了明显的脂质代谢紊乱,伴随高胰岛素血症和胰岛素抵抗;血清转氨酶水平,TNF-α水平较空白对照组明显升高;血清和肝组织中GSH含量、SOD活力明显降低,MDA含量升高;肝组织TBP-2 mRNA的表达较空白对照组明显降低（P<0.01）;出现了轻到中度脂肪变,且无炎细胞浸润。实验干预组大鼠血清和肝组织脂质含量较实验对照组均有明显改善,同时反映胰岛素抵抗的ISI也较实验对照组显著升高;TNF-α、转氨酶水平、MDA含量明显降低,GSH含量、SOD活力明显升高;肝组织TBP-2 mRNA较实验对照组表达无明显改变,肝组织脂变程度较实验对照组明显减轻（P<0.01）。13周末和17周末,实验对照组大鼠胰岛素抵抗程度较均前无明显进展;分别与其同期空白对照组相比,血清和肝组织脂质含量、血清TNF-α含量、转氨酶水平明显升高;血清和肝组织MDA含量明显升高,GSH含量、SOD活力、HDL-C含量明显降低;肝组织TBP-2 mRNA表达显著降低（P<0.01）;EC2组肝组织出现中到重度脂肪变,EC3组出现弥漫性脂肪变性及气球样变性,并出现炎细胞浸润和点、灶状坏死,炎症活动度计分明显高于同期空白对照组（P<0.01）。实验干预组大鼠胰岛素抵抗及脂质代谢紊乱有明显改善,血清转氨酶、TNF-α水平明显降低;血清和肝组织MDA含量明显降低,GSH含量、SOD活力、HDL-C含量明显升高;肝组织TBP-2 mRNA表达较同期实验对照组显著降低（P<0.01）;肝组织脂变程度、炎症活动度也较同期实验对照组明显减轻（P<0.01）。结论:1.脂质代谢紊乱,氧化应激和脂质过氧化损伤以及一些细胞因子如TNF-α紊乱,胰岛素抵抗与NAFLD的发生密切相关。2.NAFLD大鼠肝组织TBP-2 mRNA表达下调,并且可能在形成单纯性脂肪肝时降至最低值;首次证明NAFLD动物模型中TBP-2 mRNA表达下调。3.降脂益肝冲剂对实验性大鼠NAFLD有防治效果,其可能的作用机制如下:（1）降脂益肝冲剂能升高胰岛素敏感指数改善胰岛素抵抗,显著改善高血脂、高肝脂状态,从而很好地调整脂质代谢,减少肝脏脂质沉积减轻肝细胞脂肪变性,且有明确的抗炎效应,同时能显著降低血清ALT、AST水平,促进肝功能的恢复。（2）降脂益肝冲剂能提高抗氧化酶GSH含量和SOD的活性,降低脂质过氧化物MDA含量,降低氧化应激和脂质过氧化损伤,纠正体内氧化抗氧化失衡状态。（3）降脂益肝冲剂能够下调肝组织TBP-2 mRNA的表达。（4）降脂益肝冲剂能够从多角度、多靶点对NAFLD的发生发展进行干预,且早期治疗长疗程应用对NAFLD的防治作用更好,该药值得推广应用。

论文目录

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