Pleurotus属食用菌种的分子鉴别技术研究

论文摘要

Pleurotus属是一类分布广泛的且具有食、药用价值的木腐生真菌,近年来侧耳的生产发展很快,种类较多但分类较为混乱。因此建立一套侧耳属种的鉴定技术具有重要意义。本研究利用ITS序列及ITS-RFLP分析,对福建省食用菌种质资源保藏管理中心的Pleurotus属12种食用菌、559个菌株进行分子鉴别技术研究,清除了同种异名和同名异种的菌株,并建立了侧耳属生物学种的鉴别技术。具体结果如下:1、供试侧耳的ITS区（含ITS 1,5.8S rDNA和ITS 2）序列的长度范围为630-667bp,其中肺形侧耳为630bp,红平菇为667bp。根据ITS序列,Pleurotus属12种食用菌分为鲍鱼菇、金顶侧耳、红平菇、虎奶菇、肺形侧耳（凤尾菇和秀珍菇）、杏鲍菇、白灵菇（白灵菇和阿魏蘑）和糙皮侧耳（小平菇和平菇）8类,与报道的生物学种相符。高温平菇是一个无效种。2、使用了AluⅠ、DraⅠ、EcoRⅠ、HaeⅢ、MaeⅠ、Sau3AⅠ、SphⅠ七种酶,对Pleurotus属12种食用菌、585个菌株酶切分析,有效的清理了混乱菌株。ITS-RFLP分析结果和部分菌株出菇的子实体相吻合。建立了以ITS大小,AluⅠ、HaeⅢ、MaeⅠ酶切的侧耳属生物学种鉴定技术。3、利用建立的侧耳属生物学种鉴定技术,对7个可能是侧耳属菌株进行ITS大小,AluⅠ、HaeⅢ、MaeⅠ和DraⅠ酶切分析,得到5个是侧耳属的菌株,2个非侧耳属的菌株。经ITS序列分析,证实ITS-RFLP鉴定的准确性,表明ITS-RFLP可用于侧耳属种的鉴定。4、本研究采用ITS序列及ITS-RFLP技术,对侧耳属的12个种亲缘关系进行了研究,结果表明,鲍鱼菇、金顶侧耳、红平菇和虎奶菇等与其它侧耳的亲缘关系较远。鲍鱼菇和囊盖侧耳,金顶侧耳与白黄侧耳,红平菇和桃红侧耳,凤尾菇、秀珍菇和肺形侧耳,糙皮侧耳和佛罗里达,分别是同一个种的不同名称。ITS-RFLP有很好的稳定性和重复性,对侧耳属菌株种性的快速鉴定具有指导意义。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 第一节 侧耳属（平菇属）概述
• 第二节 侧耳属真菌系统分类研究进展
• 2.1 传统的分类研究
• 2.2 交配亲和试验分类研究
• 2.3 同工酶分析研究
• 2.4 DNA分子的分类研究
• 第三节 本论文研究目的和意义
• 第二章 鲍鱼菇种质资源的ITS-RFLP分析
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基与菌丝培养
• 1.3 DNA提取
• 1.4 ITS PCR及测序
• 1.5 ITS-RFLP
• 2 结果与分析
• 2.1 ITS-PCR分析
• 2.2 ITS序列分析
• 2.3 ITS-RFLP分析
• 3 讨论
• 第三章 金顶侧耳种质资源的ITS-RFLP分析
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基与菌丝培养（同第二章）
• 1.3 DNA提取（同第二章）
• 1.4 ITS PCR及测序（同第二章）
• 1.5 ITS-RFLP（同第二章）
• 2 结果与分析
• 2.1 ITS-PCR分析
• 2.2 ITS序列分析
• 2.3 ITS-RFLP分析
• 3 讨论
• 第四章 红平菇种质资源的ITS-RFLP分析
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基与菌丝培养（同第二章）
• 1.3 DNA提取（同第二章）
• 1.4 ITS PCR及测序（同第二章）
• 1.5 ITS-RFLP（同第二章）
• 2 结果与分析
• 2.1 ITS-PCR分析
• 2.2 ITS序列分析
• 2.3 ITS-RFLP分析
• 3 讨论
• 第五章 凤尾菇种质资源的ITS-RFLP分析
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基与菌丝培养（同第二章）
• 1.3 DNA提取（同第二章）
• 1.4 ITS PCR及测序（同第二章）
• 1.5 ITS-RFLP（同第二章）
• 2 结果与分析
• 2.1 ITS序列分析
• 2.2 ITS-RFLP分析
• 3 讨论
• 第六章 秀珍菇种质资源的ITS-RFLP分析
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基与菌丝培养（同第二章）
• 1.3 DNA提取（同第二章）
• 1.4 ITS PCR及测序（同第二章）
• 1.5 ITS-RFLP（同第二章）
• 2 结果与分析
• 2.1 ITS-PCR分析
• 2.2 ITS-RFLP分析
• 2.3 ITS序列分析
• 3 讨论
• 第七章 虎奶菇种质资源的ITS-RFLP分析
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基与菌丝培养（同第二章）
• 1.3 DNA提取（同第二章）
• 1.4 ITS PCR及测序（同第二章）
• 1.5 ITS-RFLP（同第二章）
• 2 结果与分析
• 2.1 ITS序列分析
• 2.2 ITS-RFLP分析
• 3 讨论
• 第八章 高温平菇种质资源的ITS-RFLP分析
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基与菌丝培养（同第二章）
• 1.3 DNA提取（同第二章）
• 1.4 ITS PCR及测序（同第二章）
• 1.5 ITS-RFLP（同第二章）
• 2 结果与分析
• 2.1 ITS-PCR分析
• 2.2 ITS序列分析
• 2.3 ITS-RFLP分析
• 3 讨论
• 第九章 杏鲍菇种质资源的ITS-RFLP分析
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基与菌丝培养（同第二章）
• 1.3 DNA提取（同第二章）
• 1.4 ITS PCR及测序（同第二章）
• 1.5 ITS-RFLP（同第二章）
• 2 结果与分析
• 2.1 ITS序列分析
• 2.2 ITS-RFLP分析
• 3 讨论
• 第十章 白灵菇种质资源的ITS-RFLP分析
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基与菌丝培养（同第二章）
• 1.3 DNA提取（同第二章）
• 1.4 ITS PCR及测序（同第二章）
• 1.5 ITS-RFLP（同第二章）
• 2 结果与分析
• 2.1 ITS序列分析
• 2.2 ITS-RFLP分析
• 3 讨论
• 第十一章 阿魏蘑种质资源的ITS-RFLP分析
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基与菌丝培养（同第二章）
• 1.3 DNA提取（同第二章）
• 1.4 ITS PCR及ITS-RFLP（同第二章）
• 1.5 ITS序列分析ITS-RFLP（同第二章）
• 2 结果与分析
• 2.1 ITS-RFLP分析
• 2.2 ITS序列分析
• 3 讨论
• 第十二章 小平菇种质资源的ITS-RFLP分析
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基与菌丝培养（同第二章）
• 1.3 DNA提取（同第二章）
• 1.4 ITS PCR（同第二章）
• 1.5 ITS-RFLP（同第二章）
• 1.6 ITS序列分析（同第二章）
• 2 结果与分析
• 2.1 小平菇PCR-ITS扩增
• 2.2 ITS-RFLP分析
• 2.3 ITS序列分析
• 3 讨论
• 第十三章 平菇种质资源的ITS-RFLP分析
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基与菌丝培养（同第二章）
• 1.3 DNA提取（同第二章）
• 1.4 ITS PCR（同第二章）
• 1.5 ITS-RFLP（同第二章）
• 1.6 ITS序列分析（同第二章）
• 2 结果与分析
• 2.1 ITS-RFLP分析
• 2.2 ITS序列分析
• 3 讨论
• 第十四章 研究总结
• 1 平菇同种异名和同名异种的清理
• 2 ITS-RFLP分子鉴定技术的建立
• 3 ITS-RFLP分子鉴定技术的可行性
• 第十五章 ITS-RFLP分子鉴定技术的初步应用
• 1.材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基与菌丝培养（同第二章）
• 1.3 DNA提取（同第二章）
• 1.4 ITS PCR（同第二章）
• 1.5 ITS-RFLP（同第二章）
• 1.6 ITS序列分析（同第二章）
• 2.结果与分析
• 2.1 ITS-PCR分析
• 2.2 ITS-RFLP分析
• 2.3 7个待测菌株的ITS序列分析
• 3 讨论
• 参考文献
• 致谢