赤水栽培金钗石斛质量控制的初步研究

论文摘要

石斛（Dendrobine）是我国常用名贵中药材,为兰科石斛属多种植物的新鲜或干燥茎的统称。在《神农本草经》与《本草纲目》中,石斛被列为上品,具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、明目强身等功效。现代药理研究表明,石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力、扩张血管及抗血小板凝集等作用,因此石斛在临床上及中药复方中被广泛应用。我国有76种石斛属植物,其中有30多种作为药用,金钗石斛（Dendrobium nobile）为《中国药典》收载的石斛品种,也是研究最多的品种之一。本文以贵州省赤水市不同地域产的12批次金钗石斛为研究材料,首先比较了不同提取方法对金钗石斛植物中的总生物碱提取效率的差异,以选取提取最佳的提取方法。之后建立紫外可见分光光度法（UV-Vis）和高效液相色谱法（HPLC）对金钗石斛植物中总生物碱含量以及主要成分-石斛碱含量检测的方法。这两种方法均可作为评判药材质量的标准之一。根据总生物碱与石斛碱含量测定的结果,结合金钗石斛生长环境中重金属含量数据,初步分析重金属含量对金钗石斛质量的影响。结果表明:1、比较了三种不同的提取方法,确定超声提取法提取效率高且操作简便、省时,之后对该提取方法中的条件进行了优化,最后确定生物碱类物质的提取条件为以氯仿为溶剂,在频率50 Hz、温度70℃条件下,于超声振荡器中振荡提取30 min×3次。2、运用酸性染料比色法,在620nm处,利用UV-Vis测定了贵州境内金钗石斛植物总生物碱的含量。石斛碱的标准曲线范围是2-20μg/ml,回归方程为:A=-0.0016+0.0327C（r=0.99984,n=5）,并且稳定性、加样回收率等指标均表明以该方法测定总生物碱含量是可靠的。测定结果范围在0.237%-0.480%之间。3、选取石斛碱含量作为质量控制指标,运用高效液相色谱法,直接测定了金钗石斛中石斛碱的含量。石斛碱标准曲线范围是20-200ng/μl,回归方程为A=115936+6387.6C （ng/μl）,相关系数R=0.9993,精密度、稳定性、加样回收率等指标表明该法测定石斛碱含量是可靠的。测定结果范围在0.073-0.143%之间。4、土壤中重金属含量对总生物碱以及石斛碱的含量有较明显的影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 石斛属植物研究现状
• 1.1 石斛属植物形态特征
• 1.2 石斛属植物的化学成分
• 1.2.1 生物碱
• 1.2.2 多糖
• 1.2.3 菲类、芪类、联苄类、芴酮化合物
• 1.2.4 酯类化合物
• 1.2.5 微量元素和游离氨基酸
• 1.2.6 糖苷类化合物
• 1.2.7 倍半萜类
• 1.2.8 其它
• 1.3 石斛属植物药理作用研究
• 1.3.1 免疫调节、抗肿瘤、抗突变作用
• 1.3.2 对胃肠道的作用
• 1.3.3 对心血管系统作用
• 1.3.4 降血糖、降血脂作用
• 1.3.5 抗氧化、抗衰老
• 1.3.6 其它药理作用
• 1.4 现代仪器分析方法在石斛属植物研究中的应用
• 1.4.1 薄层色谱法
• 1.4.2 高效液相色谱法
• 1.4.3 气相色谱法
• 1.4.4 分光光度法和红外光谱法
• 1.4.5 核磁共振法
• 1.4.6 分子生物学方法
• 1.4.7 结论
• 2 生物碱提取方法
• 2.1 传统提取方法：溶剂提取法
• 2.2 新技术的采用
• 2.2.1 酶法
• 2.2.2 微波超声辅助提取法
• 2.2.3 超声提取技术
• 2.2.4 超临界萃取技术
• 第二章 赤水栽培金钗石斛质量控制的初步研究
• 1 不同提取方法对金钗石斛生物碱提取率的影响
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 仪器、试剂与材料
• 1.1.2 实验方法
• 1.1.3 提取率计算
• 1.2 结果与分析
• 1.2.1 不同方法对粗提物提取率的影响
• 1.2.2 不同溶剂对粗提物提取率的影响
• 1.2.3 氯仿- 超声波提取法最佳工艺的选择
• 1.2.4 最佳提取工艺的验证
• 1.3 讨论
• 2 酸性染料比色法测定金钗石斛总生物碱含量
• 2.1 仪器、试剂与材料
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 材料
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 实验材料的预处理
• 2.2.2 供试品溶液的制备
• 2.2.3 对照品溶液的配置
• 2.2.4 检测波长的确定
• 2.2.5 总生物碱含量标准曲线的绘制
• 2.2.6 样品中总生物碱的测定
• 2.2.7 稳定性实验
• 2.2.8 重现性实验
• 2.2.9 加样回收率实验
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 检测波长的确定
• 2.3.2 总生物碱含量标准曲线的绘制
• 2.3.3 稳定性实验
• 2.3.4 重现性实验
• 2.3.5 加样回收率实验
• 2.3.6 样品测定结果
• 2.4 小结
• 3 HPLC 法测定赤水栽培金钗石斛中石斛碱的含量
• 3.1 材料、仪器与试剂
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 仪器
• 3.1.3 对照品及试剂
• 3.2 实验方法与结果
• 3.2.1 色谱条件
• 3.2.2 检测波长确定
• 3.2.3 对照品溶液的制备
• 3.2.4 供试品溶液的制备
• 3.2.5 标准曲线的绘制
• 3.2.6 精密度实验
• 3.2.7 稳定性实验
• 3.2.8 重现性实验
• 3.2.9 加样回收率实验
• 3.2.10 样品测定
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 检测波长确定
• 3.3.2 标准曲线的绘制
• 3.3.3 精密度实验
• 3.3.4 稳定性实验
• 3.3.5 重现性实验
• 3.3.6 加样回收率实验
• 3.3.7 样品测定结果
• 3.4 小结
• 4 金钗石斛栽培质量与重金属含量相关性的初步研究
• 4.1 实验材料及其处理
• 4.2 重金属含量测定结果
• 4.3 分析与讨论
• 参考文献
• 致谢