初乳胰岛素生长因子-Ⅰ提取物的细胞促长及对肠黏膜修复作用的研究

论文摘要

胃肠黏膜及上皮损伤在临床上常见,严重的黏膜损伤会引发全身性的病理、生理、及内脏功能紊乱。初乳中的胰岛素生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）是一种在分子结构上与胰岛素类似的活性蛋白多肽物质,在牛初乳中大量存在,是牛初乳中最重要的促生长因子。本实验主要通过初乳IGF-Ⅰ提取物对体外细胞以及损伤大鼠肠黏膜的作用来了解其对胃肠黏膜损伤的修复作用。本研究主要以牛初乳为原料,利用超滤、离子交换层析技术提取IGF-Ⅰ。通过体外、体内试验研究探讨初乳中IGF-Ⅰ提取物对肠黏膜修复。体外试验主要通过人体肠道细胞系CaCO-2的增殖实验来研究初乳中IGF-Ⅰ提取物;体内试验采用腹腔内注射MTX的方法制备SD大鼠小肠炎模型。实验设正常对照组,MTX模型对照组（20μg/kg）,牛初乳IGF-Ⅰ提取物修复组（75μg/kg）,IGF-Ⅰ修复组（75μg/kg）。制模当天开始,每日按剂量灌胃一次,正常对照组和模型组灌正理盐水。分别在第3d和第6d处死大鼠,采用分光光度法检测大鼠血浆二氨氧化酶（DAO）活性和血浆D-乳酸水平,光镜下观察小肠组织病理形态学改变。体外试验结果显示随着IGF-Ⅰ提取物浓度的增加,对细胞增殖的促进作用逐渐增强,达到并超过一定浓度（100ng/mL）时,增殖作用达到饱和;用100ng/mLIGF-Ⅰ提取物处理MTX模型组细胞,发现IGF-Ⅰ提取物能够显著刺激受损的CaCO-2细胞增殖（P<0.01）。体内试验结果显示,与对照组相比,在第3d时模型组大鼠血浆DAO活性和血浆D-乳酸水平明显升高（P<0.01）,小肠损伤程度明显高于对照组（P<0.01）,牛初乳中IGF-Ⅰ提取物组和IGF-Ⅰ组可降低血浆DAO活性及D-乳酸水平（P<0.01）,减轻小肠损伤程度（P<0.01）;在第6d时,无论与第6d的MTX模型组还是与第3d的牛初乳IGF-Ⅰ提取物修复组及IGF-Ⅰ修复组DAO活性及D-乳酸水平都有明显的降低（P<0.01）,小肠损伤程度也明显减轻（P<0.01）。本试验结果说明初乳中IGF-Ⅰ提取物对人体肠道细胞系CaCO-2有显著的促增殖作用,在超过100ng/mL时,作用趋向饱和,不抑制细胞增殖;初乳IGF-Ⅰ提取物对肠黏膜的通透性具有一定保护作用,可减轻炎细胞的浸润。通过该课题对IGF-Ⅰ与肠黏膜损伤修复及伤口愈合关系的研究,最终成果是开发能快速治疗肠黏膜损伤或伤口愈合的药物。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 引言
• 1.1 研究背景
• 1.1.1 立题背景
• 1.1.2 课题来源
• 1.2 牛初乳及其营养特征
• 1.2.1 牛初乳的主要功能性因子
• 1.2.2 牛初乳的营养特征
• 1.3 IGF-Ⅰ的临床应用
• 1.3.1 IGF-Ⅰ与糖尿病
• 1.3.2 IGF-Ⅰ与骨骼疾病
• 1.3.3 IGF-Ⅰ与分解代谢疾病
• 1.3.4 IGF-Ⅰ与癌症
• 1.3.5 IGF-Ⅰ的其它临床应用
• 1.4 胃肠黏膜损伤和修复研究进展
• 1.4.1 抗微生物肽
• 1.4.2 细胞因子
• 1.4.3 GhrelIn
• 1.4.4 谷氨酰胺（glutaIne，Gln）
• 1.5 IGF-Ⅰ 对胃肠道的作用
• 1.5.1 短肠综合症（short bowel syndrome，SBS）
• 1.5.2 消化性胃肠溃疡
• 1.5.3 肠黏膜炎
• 1.5.4 炎症性肠病
• 1.6 MTX 诱导大鼠小肠炎模型
• 1.7 研究的内容和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 IGF-Ⅰ的分离提取
• 2.1.1 试验材料
• 2.1.2 试验方法
• 2.2 牛初乳中IGF-Ⅰ提取物对人体肠道细胞的增殖作用
• 2.2.1 试验材料
• 2.2.2 试验方法
• 2.3 牛初乳IGF-Ⅰ提取物对大鼠肠黏膜的修复作用
• 2.3.1 试验材料
• 2.3.2 试验方法
• 2.4 统计分析
• 3 结果与分析
• 3.1 牛初乳中IGF-Ⅰ含量
• 3.1.1 牛初乳中蛋白质含量的测定
• 3.1.2 牛初乳中蛋白质含量的测定
• 3.2 牛初乳中IGF-Ⅰ提取物对细胞促长作用
• 3.2.1 CaCO-2 细胞形态学观察
• 3.2.2 牛初乳IGF-Ⅰ提取物对CaCO-2 细胞促长作用
• 3.3 牛初乳IGF-Ⅰ提取物对大鼠肠黏膜的修复作用
• 3.3.1 大鼠肠黏膜损伤模型
• 3.3.2 大鼠一般症状及大体观察
• 3.3.3 IGF-Ⅰ 提取物对MTX 诱导大鼠血浆DAO 含量的影响
• 3.3.4 IGF-Ⅰ 提取物对MTX 诱导大鼠血浆D-乳酸含量的影响
• 3.3.5 肠黏膜组织形态学观察
• 4 讨论
• 4.1 牛初乳IGF-Ⅰ提取
• 4.2 牛初乳IGF-Ⅰ提取物对人体肠道细胞的影响
• 4.2.1 人体肠道细胞的选择
• 4.2.2 初乳IGF-Ⅰ提取物对人体肠道细胞增殖的影响
• 4.2.3 初乳IGF-Ⅰ提取物对损伤人体肠道细胞增殖的影响
• 4.3 牛初乳IGF-Ⅰ提取物对大鼠肠黏膜炎的修复
• 4.3.1 肠黏膜炎发生机制
• 4.3.2 肠黏膜组织形态学观察
• 4.3.3 大鼠血浆DAO 含量
• 4.3.4 大鼠血浆D-乳酸含量
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文