论文摘要
研究背景宫颈癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤之一,已证实,宫颈癌的发生与高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染关系密切,总体来说,HPV16,18型在全球范围内占主导地位,但高危型别HPV的流行与分布亦有明显的地域特点,已有研究表明,在中国及亚洲,HPV58是一个不容忽视的型别。高危型HPV E6、E7蛋白是HPV的主要转化蛋白。E6蛋白可与抑癌基因产物p53蛋白结合形成复合物,并通过泛素系统降解,从而阻断p53蛋白对细胞周期的负调控功能,这可能是E6蛋白诱导细胞发生转化和永生化的主要机制。而E7蛋白与pRB蛋白作用,通过降解pRb抑癌蛋白,使E2F游离,E2F下游基因活化,影响细胞周期调节,促进细胞通过G1/S检查点（checkpoint）,引起细胞增殖加快,进而引起细胞恶性转化。HPV癌蛋白对生物因子相关的宫颈癌来说,表现为肿瘤特异性相关抗原,可刺激肿瘤患者的特异性免疫反应,本实验利用基因工程技术表达HPV58E7蛋白,为探讨其免疫学特性,检测宫颈癌患者对型特异性E7蛋白的免疫反应类型以及研究其细胞转化机制奠定基础。方法设计E7基因片段特异性PCR引物,以HPV58全基因组为模板,经PCR扩增E7基因片段,利用pGEX-4T3表达质粒,构建pGEX-4T3/HPV58E7重组体,转化BL21宿主细胞,IPTG诱导表达带有GST标签的可溶性融合蛋白。经谷胱甘肽凝胶柱亲和层析纯化,凝血酶切GST标签。结果SDS-PAGE分析显示在分子量约为40KD处有新生蛋白条带,经凝血酶消化融合蛋白,所获纯化HPV58E7蛋白与预期理论值相吻合。结论利用带有GST标签的原核表达系统及其相应纯化策略,获得HPV58E7蛋白的高效制备。该产品可用于检测对于检测宫颈癌患者对型特异性E7蛋白的免疫反应类型,以及E7相互作用靶蛋白的研究。