李美珍1，2董莉黄勇王爱民周雯张治蓉兰燕宇﹡
（1贵阳医学院药学院贵州贵阳550004;2湖南省涟源市人民医院湖南娄底417100）
【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)8-0052-01
【摘要】目的建立注射用复方荭草冻干粉针生物活性测定法。方法采用小鼠凝血时间检测法,对测定方法进行了研究,并对10批注射用复方荭草冻干粉针生物活性进行测定。结果所建方法简便易行,重复性、精密度、方法适用性较好。结论该法简单,准确,可用于注射用复方荭草冻干粉针的质量控制。
【关键词】注射用复方荭草冻干粉针生物活性测定质量控制
注射用复方荭草冻干粉针处方源于贵州省民间验方,根据传统苗族用药理论,结合现代制药新技术与新方法研制开发的中药复方制剂,具有化瘀通络,活血止痛功能,用于冠心病、心绞痛心血瘀阻所致胸痹心痛证。目前已完成了Ⅲ期临床研究。本文选择小鼠凝血时间试验进行了本品生物活性测定方法的初步探索。
1.实验材料
1.1供试药物
盐酸川芎嗪(091103A3,哈尔滨三联药业有限公司),注射用复方荭草冻干粉针(20100105,由贵阳医学院贵州省药物制剂重点实验室制备)。
1.2动物
健康昆明种小鼠,体重18-22g,雌雄各半,由贵阳医学院实验动物中心提供（合格证号:SCXK(黔)2002-0001）。
2.方法［1］
昆明小鼠,体重18～22g,雌雄各半,尾静脉注射给药,于末次给药30min后,用眼科弯镊迅速摘去一侧眼球,于洁净载玻片两端各滴一滴血,血滴直径均5mm,立即用秒表计时,每隔30s用清洁大头针自血滴边缘向里轻轻拨动一次,并观察有无血丝挑起,记录采血开始至挑起血丝止所历时间,即为凝血时间,另一滴血供最后复验。将每组数据进行t检验,计算凝血时间延长率。
3.统计方法
结果用均数±标准差（x-±s）表示,所有数据采用SPSS13.0版软件进行t检验，P<0.05有统计学意义。
4.结果
4.1限值剂量研究
表1注射用复方红草冻干粉针对小鼠凝血时间的影响组别
动物数（只）剂量(g/kg•d)凝血时间(s)延长率(%)正常对照组1078.10±18.33盐酸川芎嗪组100.04×399.00±17.94*26.76高剂量组1013.5×396.40±14.98*23.43中剂量组106.8×39350±13.33*19.72低剂量组103.4×385.60±18.399.60与正常组比较，＊p<0.05注射用复方荭草冻干粉针剂量为6.8g/kg、13.5g/kg连续三次给药可明显延长小鼠的凝血时间,其延长率分别为19.72%和23.43%，与正常对照组比较有显著性差异（p<0.05）,为了增加可靠性和保证重复性,选用剂量13.5g/kg（相当于人临床用量的30倍）作为限值剂量。(经预试验，各剂量组单次给药作用不显著。)
4.2方法学验证［2］
4.2.1重复性实验
取同一批号注射用复方荭草冻干粉针进行6次平行测定试验(13.5g/kg),6次试验均可显著延长小鼠的凝血时间,与正常对照组比较有显著性差异（p<0.05），表明本方法重复性较好。
4.2.2精密度实验
同实验室不同实验人员采用注射用复方荭草冻干粉针以13.5g/kg尾静脉注射给药后进行测定,均可显著延长小鼠的凝血时间,与正常对照组比较有显著性差异（p<0.05）,其延长率分别为23.63%,19.76%,表明本方法精密度较好。
4.2.3方法适用性考察
表2不同批次注射用复方红草冻干粉针小鼠凝血时间生物活性测定结果组别批号动物数（只）剂量(g/kg•d)
凝血时间(s)延长率(%)正常对照组1078.70±15.03药物组200912231013.595.30±12.22*21.09药物组201001051013.593.00±13.25*18.17药物组201001081013.592.10±13.19*17.03药物组201001111013.596.00±19.92*21.98药物组201001151013.591.80±11.55*16.65药物组201004091013.598.80±12.50*26.81药物组201005121013.599.00±21.19*25.79药物组201005141013.590.30±15.00*14.74药物组201005161013.595.40±17.77*21.22药物组201005191013.594.10±15.13*19.57与对照组比较，＊p<0.05对不同批号的10批注射用复方红草冻干粉针进行生物活性测定,与正常对照组,均具有显著延长小鼠凝血时间的作用（p<0.05）,不同批号之间生物活性无显著性差异,表明本方法适用性好。
5.讨论
中药具有成分复杂多变,活性成分多,药效成分和毒性成分不甚明确等特点,为产品的质量控制带来了困难,因此在中药现代化的研究过程中,必须重视质量控制与疗效评价标准的研究相结合［3］。为了提高注射用复方荭草冻干粉针的质量评价标准,我们以小鼠凝血时间试验对其生物活性测定方法进行了研究,该法具有较好的精密度、重复性和适用性好,且操作方便、经济安全,可以作为本品质量控制的指标。
参考文献
[1]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版,2006:481.
[2]国家药典委员会编.《中国药典》2010年版.一部附录хⅧC[S].北京:中国医药科技出版,2010:132-133.
[3]国家食品药品监督管理局.中药、天然药物注射剂基本技术要求2007[S].北京:国家食品药品监督管理局,2007.
*基金项目：国家科技重大专项资助项目(2008ZX09101-021),贵州省科技重大专项(黔科合重大专项字[2007]6010)