龙葵碱对小鼠睾丸细胞毒性作用机制的研究

论文摘要

龙葵碱（Solanine）,又名茄碱,主要存在于茄科植物中,如马铃薯、番茄、茄子,在马铃薯的绿色果皮及芽中的含量较高,具有较大的毒性,是引起人类中毒的主要成分。有研究表明龙葵碱具有一定的中枢毒性、胃肠道毒性,能够显著影响孕鼠胚胎的分化及其生长发育,同时,在孕早期能够导致胚胎死亡；此外,龙葵碱还具有一定的雄性生殖毒性,前期实验表明龙葵碱可导致雄性小鼠精子畸形,精子数量减少,对生精细胞具有一定的损伤作用,但是其睾丸毒性作用机制并不明确,本课题采用腹腔注射方法对龙葵碱作用于小鼠睾丸引起的睾丸毒性进行研究,初步探讨龙葵碱对小鼠睾丸毒性的作用机制,为龙葵碱的雄性生殖毒性研究提供重要的实验依据。本实验中采用腹腔注射染毒,染毒剂量分别是1/8LD50: 5.25mg/kg; 1/4LD50:10.5mg/kg; 1/2LD50: 21mg/kg,另设阴性对照组（生理盐水组）,龙葵碱不同浓度组连续染毒14天。小鼠睾丸病理组织切片与脏器系数的结果显示,龙葵碱可显著影响睾丸发育,随着龙葵碱剂量增加,睾丸病理变化明显,睾丸重量与脏器系数显著下降（与对照组相比,P<0.05、P<0.01）,曲细精管具有明显的形态学萎缩、数量增生现象,间质区减小,大量细胞脱落至管腔及管腔外面,间质区细胞增多,生精细胞与支持细胞分离,管腔内细胞排列紊乱。免疫组织化学的结果显示高剂量的龙葵碱使支持细胞中的波形蛋白表达显著下降,排列无序,波形蛋白微丝表达消失,细胞骨架崩解,阳性支持细胞脱落至曲细精管官腔之中,阳性细胞数量明显下降（与对照组相比,P<0.01）。对小鼠血清睾酮含量的检测表明龙葵碱并不能显著影响雄性小鼠的睾酮分泌,各龙葵碱剂量组之间小鼠血清睾酮的含量没有显著性差异,但有一定的下降趋势。流式细胞仪的检测结果表明龙葵碱可显著下调睾丸内的3p-羟甾体脱氢酶（3β-HSD）的水平（与对照组相比,P<0.01）,同时,显著上调睾丸内黄体生成素（LH）的水平（与对照组相比,P<0.05、P<0.01）。这可能是由于龙葵碱损伤了睾丸间质细胞,使得间质细胞分泌3β-HSD下降,从而启动了机体的负反馈调节,促进垂体大量分泌黄体生成素,进而维持了血清睾酮的含量没有明显的下降。Western blot实验结果表明龙葵碱可显著下调睾丸支持细胞内雄激素结合蛋白（ABP）的表达（与对照组相比,P<0.01）,这可能是由于龙葵碱损伤睾丸支持细胞,影响睾丸支持细胞的分泌功能,进而下调了ABP蛋白的表达。综上所述,龙葵碱可通过影响睾丸支持细胞及间质细胞的生理功能进而产生睾丸毒性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 课题来源、目的和意义
• 1.2 龙葵碱的研究现状
• 1.2.1 龙葵碱的提取方法
• 1.2.2 龙葵碱的体内过程
• 1.2.3 龙葵碱的药理学研究
• 1.2.4 龙葵碱的毒理学研究
• 1.3 睾丸细胞在雄性生殖毒性研究中的应用
• 1.3.1 睾丸支持细胞的功能及在毒理学中的应用
• 1.3.2 睾丸间质细胞的功能及在毒理学中的应用
• 1.3.3 管周细胞的生理功能
• 1.4 论文的研究内容
• 2 龙葵碱对小鼠睾丸毒性的病理组织观察
• 2.1 引言
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验方法
• 2.3 结果分析
• 2.3.1 病理组织学观察结果
• 2.3.2 小鼠睾丸脏器系数的测定结果
• 2.4 本章小结
• 3 龙葵碱对小鼠睾丸中波形蛋白表达的影响
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验方法
• 3.3 结果分析
• 3.4 本章小结
• 4 龙葵碱对小鼠睾丸中3β-羟甾体脱氢酶含量的影响
• 4.1 引言
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 实验方法
• 4.3 结果分析
• 4.4 本章小结
• 5 龙葵碱对小鼠睾丸中黄体生成素（LH）含量的影响
• 5.1 引言
• 5.2 实验部分
• 5.2.1 实验材料
• 5.2.2 实验方法
• 5.3 结果分析
• 5.4 本章小结
• 6 龙葵碱对小鼠血清中睾酮含量的影响
• 6.1 引言
• 6.2 实验部分
• 6.2.1 实验材料
• 6.2.2 实验方法
• 6.3 结果分析
• 6.3.1 睾酮标准曲线的测定
• 6.3.2 龙葵碱对小鼠血清睾酮含量的影响
• 6.4 本章小结
• 7 龙葵碱对小鼠睾丸中雄激素结合蛋白（ABP）含量的影响
• 7.1 引言
• 7.2 实验部分
• 7.2.1 实验材料
• 7.2.2 实验方法
• 7.3 结果分析
• 7.4 本章小结
• 8 讨论
• 8.1 龙葵碱对小鼠睾丸支持细胞形态结构的影响
• 8.2 龙葵碱对小鼠睾丸间质细胞的影响
• 8.3 龙葵碱对小鼠体内激素的影响
• 8.4 龙葵碱对小鼠睾丸支持细胞分泌功能的影响
• 8.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢
• 中英文对照表