新的丁内酯衍生物对血管形成的影响及其作用机制研究

论文摘要

血管生成在生理过程（如胚胎发育）和病理过程（如肿瘤生长、动脉粥样硬化）中都起到关键作用。血管形成是一个多种细胞因子和多种细胞成分参与的,动态、协调的复杂过程,有多条信号转导通路参与,包括:内皮细胞的增殖、存活、凋亡、细胞外基质降解、迁移、分化和形态发生等。其中抑制血管内皮细胞凋亡（VEC）令其存活被认为是血管发生的关键机制。我们以前研究发现,一种新型的丁内酯衍生物,3-苄基-5-（2-硝基苯氧甲基）-γ-丁内酯（3BDO）能够有效抑制去血清和生长因子诱导的血管内皮细胞凋亡。本论文从化学遗传学的角度,研究了3BDO在调节血管形成中的作用及其可能作用的机制。研究方法:1.人脐静脉内皮细胞（HUVECs）和人脐动脉平滑肌细胞（VSMCs）的分离和培养,参考[Jaffe et al,1973;Laik et al,2004].2.大鼠主动脉环培养,参考[Nicosia & Ottinetti,1990]3.体外血管形成检测:Matrigd方法,参考[Kureishi Y et al,2000]4.体外细胞迁移检测:平面单层细胞损伤愈合实验,结合倒置相差显微镜观察,参考[Bürk,1973;Vasvari et al,2007]5.倒置相差显微镜下观察细胞形态变化6.吖啶橙染色结合激光扫描共聚焦显微镜观察,检测细胞核变化7.MTT法检测细胞生长率8.Na+K+—ATP酶活性检测试剂盒检测Na+K+—ATP酶活性9.线粒体膜电位（MMP）检测:利用荧光探针（TMRM）并结合激光扫描共聚焦显微术检测,参考[Falchi et al,2005】研究结果1.大鼠主动脉环血管形成实验显示,120μM 3BDO对VECs和VSMCs具有选择性的作用。2.体外Matrigel毛细血管样结构形成实验显示,在去除血清和FGF-2的条件下,120μM 3BDO处理HUVECs48小时,HUVECs在Matrigel上形成毛细血管样结构。3.单层细胞损伤愈合实验显示,120μM 3BDO处理HUVECs24小时,HUVECs仍能维持其迁移能力。4.AO染色结合荧光显微镜检测发现,120μM 3BDO处理VSMCs24小时,细胞核仍保持完整:MTT结果显示120μM 3BDO处理VSMCs24小时,与对照组相比,VSMCs的生长显著被抑制;单层细胞损伤愈合实验显示,120μM 3BDO处理VSMCs18小时,VSMCs迁移能力显著降低。5.用120μM 3BDO处理HUVECs 24小时,与对照组相比,HUVECs的Na+K+—ATP酶活性显著性降低;但是120μM 3BDO处理VSMCs24小时,其Na+K+—ATP酶活性没有明显变化。6.用120μM 3BDO处理HUVECs24小时,与对照组相比,其线粒体膜电位没有明显变化:但是120μM 3BDO处理VSMCs24小时,VSMCs的线粒体膜电位显著性降低。结论1.在调节血管形成中,3BDO对VECs和VSMCs具有选择性的作用。2.3BDO能够抑制VSMCs的增殖和迁移,抑制VECs的凋亡并维持VECs在MATRIGEL上的成血管能力。3BDO这种对VECs和VSMCs不同的作用,将有利于维持血管内皮细胞功能的完整和控制动脉粥样硬化的发展。3.3BDO选择性的影响了VECs和VSMCs中线粒体膜电位和Na+K+—ATP酶活性。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 论文正文
• 一 前言
• 二 材料与方法
• 三 结果
• 四 讨论
• 小结
• 参考文献
• 发表论文
• 致谢
• 学位论文评阅及答辩情况表